利用兔單B細(xì)胞技術(shù)快速鑒定高親和力和多表位的抗特異型單抗

用于疾病的單克隆抗體是一類快速發(fā)展的藥物，具有親和力強(qiáng)、特異性強(qiáng)、半衰期長(zhǎng)和藥理學(xué)效力強(qiáng)的特點(diǎn)。這些特性使抗體成為開(kāi)發(fā)針對(duì)多種人類疾病的有效治療方法的成熟平臺(tái)。它們的應(yīng)用領(lǐng)域不僅限于標(biāo)準(zhǔn)的免疫球蛋白G (IgG)格式，還可以擴(kuò)展到抗體片段(scFv, VHH)、藥物偶聯(lián)物和雙特異性等新型格式的"不可藥物化"靶點(diǎn)。隨著眾多抗體治療藥物(Ab1)不斷進(jìn)入臨床前開(kāi)發(fā)和臨床試驗(yàn)，這些項(xiàng)目對(duì)高質(zhì)量的關(guān)鍵生物分析試劑的需求很高。在這種情況下，抗獨(dú)特型抗體(（Anti-idiotype antibody, Anti-ID Abs)已成為臨床前和臨床階段生物分析應(yīng)用的優(yōu)選方案之一。常用的制備方法包括體內(nèi)雜交瘤技術(shù)、體外噬菌體展示免疫抗體庫(kù)或合成抗體庫(kù)。

兔單抗以其高親和力和多樣性而聞名，使其成為治療候選生物分析程序中高度專業(yè)化研究試劑的潛在有用來(lái)源。過(guò)去兔單克隆抗體的產(chǎn)生采用雜交瘤技術(shù);然而，目前的發(fā)現(xiàn)是由更強(qiáng)大的單個(gè)B細(xì)胞培養(yǎng)和克隆方法驅(qū)動(dòng)的。

高質(zhì)量的抗獨(dú)特型抗體(Anti-ID Abs, Ab2)，特別是CDR特異性的Ab2，對(duì)開(kāi)發(fā)敏感、特異和穩(wěn)健的PK檢測(cè)和抗藥物抗體(ADA)檢測(cè)至關(guān)重要，以支持藥物開(kāi)發(fā)項(xiàng)目的臨床前和臨床研究。研究人員使用基于兔單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)的方法來(lái)擴(kuò)大了常規(guī)制備大樣本抗獨(dú)特型抗體的能力，并且取得了很高的成功。

基于單個(gè)B細(xì)胞技術(shù)的Xten? Mab Single B兔單克隆抗體有三個(gè)主要流程，鑒定和分離單個(gè)B細(xì)胞；擴(kuò)增和克隆抗體基因；表達(dá)、篩選和鑒定抗原特異性抗體。

 Single B兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)以單個(gè)B細(xì)胞為起始點(diǎn)，利用每個(gè)B細(xì)胞只產(chǎn)生一種特異性抗體的特性，直接從免疫的兔子中通過(guò)隨機(jī)分離和抗原特異性分離兩種方式從外周血或淋巴組織中分離單B細(xì)胞，從單個(gè)B細(xì)胞中擴(kuò)增出抗體基因，進(jìn)而獲得抗原特異性抗體。該技術(shù)所制備的抗體具有高通量、高效率、高穩(wěn)定性、高特異性等優(yōu)點(diǎn)，保留了豐富的基因多樣性和輕重鏈可變區(qū)的天然配對(duì)，應(yīng)用前景廣泛，是高效的抗體篩選方法之一。特別是在快速應(yīng)對(duì)病原微生物傳染病的抗體開(kāi)發(fā)上有著巨大優(yōu)勢(shì)。

在這項(xiàng)研究中，研究人員建立了一種富集IgG+ B細(xì)胞的方法，并從外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中鑒定出抗原特異性IgG+ B細(xì)胞。通過(guò)基于磁珠的負(fù)向選擇策略有效地清除PBMCs中的非IgGB細(xì)胞，包括IgM B細(xì)胞，髓系細(xì)胞和T細(xì)胞。這種技術(shù)不僅提高了IgG+ B細(xì)胞的數(shù)量，而且還縮短了分選時(shí)間，從而有可能提高B細(xì)胞的存活率，這有助于提高PCR及后續(xù)分子克隆的成功率。

在臨床前開(kāi)發(fā)和臨床試驗(yàn)期間，抗獨(dú)特型抗體是PK和ADA檢測(cè)所需的寶貴試劑，用于治療藥物的生物分析支持。高靈敏度、高特異性、高親和力以及表位結(jié)合特異性是該類抗體試劑的重要特點(diǎn)?；谕脝慰寺?/span>B細(xì)胞技術(shù)發(fā)現(xiàn)的單克隆抗體使研究人員能夠在滿足嚴(yán)格的生物分析性能要求的同時(shí)，在多種單克隆抗體項(xiàng)目中持續(xù)、高效和高產(chǎn)地制備出具有所需特性的單克隆抗獨(dú)特型抗體組合，為單抗治療開(kāi)發(fā)項(xiàng)目的生物分析支持提供了有價(jià)值的關(guān)鍵試劑。