抗癌效果翻倍！對CAR-T療法“下功夫”做多種改造，助力攻克實體瘤！

免疫療法已然成為人類對抗癌癥新的希望，而CAR-T療法則是近年來有前景的腫瘤免疫療法之一。 這項技術(shù)在治療各種惡性腫瘤方面取得了巨大進展，已成功應(yīng)用于多種血液惡性腫瘤的治療。

目前國內(nèi)外已上市的CAR-T細胞療法

特別是 2021年我國正式開啟細胞免疫治療元年 ，分別于6月份迎來CAR-T療法—— 阿基侖賽注射液 ；9月3日，迎來第二款獲批的CAR-T產(chǎn)品—— 瑞基奧侖賽注射液 ，這也是中國1類生物制品的CAR-T產(chǎn)品。2022年我國的西達基奧侖賽被美國FDA批準上市，讓這項技術(shù)在腫瘤研究領(lǐng)域被寄予厚望。 根據(jù)Clinical Trials.gov提供的數(shù)據(jù)，截至2021年4月，共有1358項活躍狀態(tài)的細胞治療試驗；與2019年~2020年24%的增長相比，2020年至2021年增長了43%。 這一增長的大部分是由于CAR-T細胞臨床試驗 ，其自2019年更新以來增加了83%，以及更多試驗測試了 其他細胞療法、TCR-T細胞療法和TIL細胞療法 。而NK/NKT細胞的試驗數(shù)量下降，尚未完全恢復(fù)。

處于活躍狀態(tài)的細胞治療試驗匯總

然而對于細胞免疫療法發(fā)展比較成熟的血液腫瘤來說，實體瘤才應(yīng)該是抗癌的“主戰(zhàn)場”！雖說是主戰(zhàn)場，但是細胞免疫療法在廣闊的實體瘤領(lǐng)域發(fā)展可謂是捉襟見肘，舉步維艱。如2021年新的全球癌癥數(shù)據(jù)指出，約90%的癌癥發(fā)病率都是由實體瘤引起，但關(guān)于實體瘤的細胞治療臨床試驗卻很少（實體瘤占40%，且大部分處于早期階段）。由此可見，實體瘤仍然是細胞免疫治療的難點。

面臨五大“困境”，CAR-T攻克實體瘤任重道遠！

CAR-T治療在實體瘤上的臨床療效差強人意。究其原因，主要在于實體瘤的細胞療法存在不少難點，主要面臨以下幾大“困境”：

缺乏獨特的腫瘤相關(guān)抗原作為CAR-T靶點

血液腫瘤的靶點大多單一且具有特異性不同，以2021年新的全球癌癥數(shù)據(jù)為例， 主要集中在CD19、CD20、CD22、BCMA等靶點。 而實體瘤的腫瘤特異性抗原（TSA）很少，目前發(fā)現(xiàn)的腫瘤高表達的抗原多為腫瘤相關(guān)抗原（TAA），在正常組織中均有表達， 這就表明會有脫靶的風險，脫靶風險高的話不僅安全性成問題，也會導(dǎo)致癌癥的復(fù)發(fā)，病情反復(fù)難愈。

不同類型實體瘤的異質(zhì)性大

實體瘤中用于CAR-T細胞療法的抗原為腫瘤特異性抗原（TSA），如EGFRvIII、前列腺癌抗原PSA、黑色素瘤相關(guān)突變抗原1（MUM1）等，這些抗原雖然在腫瘤細胞中高表達，但是在同種腫瘤類型的不同患者身上卻具有高度異質(zhì)性，從而限制CAR-T的療效。

T細胞無法有效歸巢到腫瘤部位

一些實體瘤會抑制某些趨化因子的分泌。趨化因子與其受體的相互作用會促進T細胞向腫瘤微環(huán)境的遷移。同時，CAR-T細胞表面也缺乏與實體瘤分泌的趨化因子相匹配的相關(guān)受體，造成CAR-T對腫瘤部位的歸巢能力差。

T細胞衰竭

作為一種免疫細胞，T細胞幫助對抗感染和疾病，如癌癥。但是據(jù)多項臨床試驗顯示，CAR-T細胞療法的效果會隨著時間的推移而減弱。T細胞會出現(xiàn)衰竭，當這種情況發(fā)生時，免疫系統(tǒng)的抗癌反應(yīng)會受到限制。T細胞的衰竭很可能在哪些CAR-T細胞失敗案例中起主要作用。在腫瘤內(nèi)，來源于患者并且用于CAR-T生產(chǎn)的細胞、以及回輸給患者的CAR-T細胞中，均能在不同程度上檢測到T細胞衰竭狀態(tài)。

腫瘤內(nèi)復(fù)雜的微環(huán)境對免疫有抑制作用

CAR-T細胞在實體瘤中的療效受到限制，部分原因是免疫抑制性腫瘤微環(huán)境。實體瘤中復(fù)雜的腫瘤微環(huán)境，有利于具有物理屏障、多種免疫抑制機制及多種生化因素的腫瘤進展，導(dǎo)致CAR-T細胞療法在癌癥患者臨床試驗中的療效有限。

抗癌效果翻倍！對CAR-T療法“下功夫”多種改造，助力攻克實體瘤！

雖然對抗實體瘤的道路上存在多重困境，但近年來CAR-T療法在胃癌、肝癌、胰腺癌等領(lǐng)域都有著卓越的進步。國內(nèi)外的學(xué)者更是針對CAR-T進行了多種改造，不斷地發(fā)現(xiàn)新靶點，以用于治療多種實體腫瘤。 今天無癌家園小編就給大家大致介紹下國內(nèi)外學(xué)者對CAR-T療法“下功夫”進行的多種改造，讓大家了解醫(yī)學(xué)研究者們開發(fā)治療實體瘤的CAR-T產(chǎn)品相關(guān)的前沿研究，到底取得了哪些進展和突破。

基因轉(zhuǎn)入制備“超級CAR-T細胞”，抗癌效果翻4倍！

在2018年3月5日，CAR-T領(lǐng)域迎來一項重磅研究進展。國外的研究團隊成功地開發(fā)出新一代CAR-T，通過白介素7（IL-7）和趨化因子CCL19基因轉(zhuǎn)入CAR-T細胞制備出能夠有效殺傷腫瘤的 “超級CAR-T細胞” ，能夠讓患有腫瘤的小鼠幾乎生存！

這種細胞在體內(nèi)存活時間更長并且能夠有效地幫助樹突細胞以及T細胞浸潤到腫瘤組織內(nèi)部一起殺傷腫瘤。

研究人員將這種超級CAR-T細胞稱為“7×19CAR-T”，就是在常規(guī)CAR-T基礎(chǔ)上進行改造，使常規(guī)CAR-T可以表達IL-7和CCL19兩種趨化因子。

在多種實體瘤小鼠模型中，研究結(jié)果證實， 全新CAR-T治療實體瘤的效果是目前常規(guī)CAR-T的至少4倍， 對于那些常規(guī)CAR-T幾乎無效的實體瘤，新一代CAR-T也能實現(xiàn)腫瘤的完全消除。 更重要的是，全新一代CAR-T還解決了常規(guī)CAR-T治療后易復(fù)發(fā)的難題。 即使在新一代CAR-T消除實體瘤100天之后，再次接種癌細胞，這些癌細胞也無法生長出腫瘤。 上述的臨床前實驗的設(shè)想有幸在人體中得到實現(xiàn)！針對CAR-T細胞進入腫瘤組織困難、CAR-T細胞進入腫瘤組織后容易被其他免疫抑制性的分子或細胞所阻擋無法發(fā)揮作用等問題，我國的醫(yī)學(xué)研究者想到的辦法是讓CAR-T細胞同時分泌細胞因子和趨化因子。這些因子好比給CAR-T細胞配置了一個自帶的能量馬達，能夠增強CAR-T細胞進入腫瘤內(nèi)部的能力。 就在7月29日，國際知名雜志《Journal of Hematology & Oncology》刊登了我國醫(yī)學(xué)研究者們的一項成功改造CAR-T技術(shù)的臨床研究，研究中提及的CAR-T產(chǎn)品選擇的靶點是 glypican-3（GPC3，主要是肝癌）和mesothelin（MSLN，又稱為間皮素，可以應(yīng)用于多種上皮癌癥，比如惡性間皮瘤、胰腺癌、胃癌、卵巢癌等）  ，為了使CAR-T細胞具有更強的進入腫瘤內(nèi)部的能力，研究人員特地加裝了白介素7（IL-7）和趨化因子CCL19。 此次研究納入的是6例具有 GPC3或MSLN表達的晚期肝細胞癌（HCC）、胰腺癌（PC）和卵巢癌（OC）患者 。治療結(jié)果格外令人驚艷！

其中1例磷脂酰肌醇蛋白多糖-3（GPC3）表達的晚期肝癌患者接受了瘤內(nèi)注射CAR-T治療，治療后肝臟病灶代謝基本消失。

更絕的是1例間皮素（MSLN）表達的晚期胰腺癌患者，接受的是靜脈回輸?shù)腃AR-T治療，治療后全身的病灶，基本都實現(xiàn)了代謝活性完全消失。

除了常見的GPC3、MSLN等靶點外，國內(nèi)外學(xué)者 基于特定腫瘤微環(huán)境會選擇合適的靶點來改造CAR-T療法，使其能夠更地狙擊癌細胞。 如下圖為不同癌癥的CAR-T靶點分類。

眾所周知，CAR-T療法能夠狙擊癌細胞歸結(jié)于將患者體內(nèi)分離出的免疫T細胞通過基因編輯的方法，裝上了一種類似于定位導(dǎo)航儀似的“CAR”。而CAR-T在實體瘤領(lǐng)域面臨諸多瓶頸就源于實體瘤缺少讓免疫細胞識別的“導(dǎo)航地址”，例如CD19、CD20、Claudin 18.2、GPC3等。

因此，在2020年國際期刊《Science》上發(fā)表的一項重磅研究中，研究人員將CLDN6作為實體瘤中的CAR靶標。

CLDN家族蛋白之前無癌家園小編提起過，比較熟悉的當屬CLDN18.2。而CLDN6(Claudin6，重組靶向緊密蛋白連接蛋白6）是一種在正常成人健康組織中不表達，但是在卵巢癌、睪丸癌、肺腺癌、子宮癌等多種癌癥類型中表達的蛋白。因此，Claudin 6很有可能是繼Claudin18.2之后，Claudin家族中另一個癌癥治療的潛力靶點。

在此基礎(chǔ)上，為了增強對癌細胞的感應(yīng)，使T細胞大量擴增，該研究中還設(shè)計了一種納米顆粒RNA疫苗——CARVac，這是一種獨特的CAR-T細胞擴增mRNA疫苗。它的設(shè)計原理是利用mRNA編碼CAR-T細胞靶向的抗原。CARVac能夠選擇性地讓淋巴結(jié)中的抗原呈遞細胞表達CAR-T細胞靶向的抗原，從而在患者體內(nèi)激發(fā)CAR-T細胞的擴增

基于以上原理，靶向?qū)嶓w瘤的新一代CAR-T療法BNT211便就此產(chǎn)生。

臨床前研究結(jié)果

BNT211在實體瘤模型中已顯示出提高CAR-T細胞擴增和效力的作用。

1.在肺腫瘤小鼠模型中，接受CAR-T細胞和CLDN6-LPX疫苗的10只小鼠中有6只顯示出大體積腫瘤的完全消退，中位生存期明顯更高。

2. 在結(jié)腸癌小鼠模型中有同樣的效果。

3.在晚期難治愈的卵巢癌小鼠模型中，CAR-T細胞植入和CLDN6-LPX疫苗接種使晚期腫瘤完全消退。

在2021年癌癥免疫治療學(xué)會（SITC）年會上公布的初步臨床試驗結(jié)果顯示，在5位可評估的CLDN6陽性癌癥患者中，4例患者獲得部分緩解，其中3例患者的初始腫瘤縮小了18%、21%和27%。

在2021年ESMO免疫腫瘤學(xué)大會上，研究人員報告了4例患者部分緩解，另外4例患者疾病穩(wěn)定，靶病變縮小，1例患者沒有臨床活動跡象。值得注意的是，4例部分緩解中有3例均為近期大劑量化療后全部復(fù)發(fā)的睪丸癌患者。

此次I期臨床試驗分為3部分，第一部分為Claudin6 CAR-T單藥治療，第二部分為CAR-T+CARVac聯(lián)合治療，第三部分為擴大研究。

2022年AACR大會上公開的為第一部分和第二部分的數(shù)據(jù)，入組患者平均接受過4~5線治療，為難治性Claudin6陽性實體瘤。

此項臨床試驗中納入的16例復(fù)發(fā)難治性晚期實體瘤患者分別為睪丸癌8例，卵巢癌4例，子宮內(nèi)膜癌、輸卵管癌、肉瘤及胃癌各1例。

療效數(shù)據(jù)方面，14例患者可評估，治療6周后4例睪丸癌患者和2例卵巢癌患者出現(xiàn)部分緩解（PR），5例疾病穩(wěn)定（SD），靶病灶縮小。1例患者與治療前相比無變化，2例患者正在進展，客觀緩解率達43%，疾病控制率高達86%。

在第12周，6例部分緩解（PR）的患者中有4例顯示反應(yīng)加深和持久，1例患者在輸注18周后達到完全緩解。較高劑量水平的所有4例睪丸癌患者的疾病均得到控制，其中3例患者表現(xiàn)出客觀反應(yīng)。此外，1例睪丸癌患者在輸注低 CAR-T 劑量水平并聯(lián)合 CARVac 后表現(xiàn)出部分緩解。

綜上，BNT211臨床試驗結(jié)果初步證實，CLDN6 CAR-T細胞聯(lián)合CAR-T的RNA疫苗（CARVac）在劑量探索階段顯示出良好的安全性，并顯示出令人鼓舞的療效。mRNA疫苗（CARVac）可用于改善CAR-T細胞的抗腫瘤作用，為利用CAR-T細胞治療難治性實體瘤提供了一種新的策略。

溶瘤病毒聯(lián)手CAR-T療法，療效勢不可擋！

溶瘤病毒與CAR-T療法兩大“”療法聯(lián)用是否會碰撞出“不一樣”的火花呢？一項2020年9月2日發(fā)表于國外知名雜志《Science Translational Medicine》上的臨床研究結(jié)果，對此進行了大膽的嘗試！ 在這項新的研究中，研究人員將兩種強效的免疫療法——溶瘤病毒（oncolytic virus）和嵌合抗原受體T細胞（CAR-T）療法結(jié)合起來，成功地靶向和單獨用CAR-T細胞療法很難治療的實體瘤。

在此臨床試驗的臨床前研究中，研究人員們早已通過對溶瘤病毒進行基因改造，使之進入腫瘤細胞，并誘導(dǎo)它們在腫瘤細胞表面上表達CD19蛋白。然后，他們能夠使用靶向CD19的CAR-T細胞來識別和攻擊這些實體瘤。

參與這項研究的Saul Priceman博士說：“此研究表明溶瘤病毒是一種強大而有前途的方法，可以與CAR-T細胞療法戰(zhàn)略性地結(jié)合起來，以便更有效地靶向?qū)嶓w瘤。兩者的結(jié)合有強大的協(xié)同效果?！?/span>

在2022年4月13日，發(fā)表在《科學(xué)轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)》雜志上的一項臨床研究顯示，溶瘤病毒介導(dǎo)的雙特異性 CAR T 細胞擴增提高了小鼠對實體瘤的療效。

此項試驗中，CAR-T療法聯(lián)合溶瘤病毒在多種實體瘤小鼠中發(fā)揮了作用，其中接受治療的 7只黑色素瘤小鼠，均表現(xiàn)出治療反應(yīng)；在第40天時，存活率，第60天時， 有6只小鼠處于無瘤狀態(tài)，治愈率高達85%。

那么，將兩大“”技術(shù)應(yīng)用于臨床研究會如何呢？就在近期，專注開發(fā)細胞療法的Mustang Bio公司宣布開啟一項CAR-T細胞聯(lián)合溶瘤病毒治療復(fù)發(fā)性膠質(zhì)母細胞瘤 (rGBM) 的1期臨床試驗。其中提及的MB-101是一種靶向IL13Rα2的CAR-T細胞療法。IL13Rα2是一種局限在GBM中表達的受體，在大多數(shù)GBM腫瘤中大量表達。 而MB-108屬于第二代減毒1型單純皰疹病毒 (HSV-1溶瘤病毒，相比于第一代在小鼠模型中改善了腫瘤中的復(fù)制，但其毒性特征與第一代相似。其優(yōu)點是能夠在腫瘤細胞中復(fù)制，從而殺死受感染的腫瘤細胞，并不斷生產(chǎn)新病毒繼續(xù)殺死腫瘤細胞。 此外，MB-109是上述兩種藥物聯(lián)合用藥的治療方案。該組合旨在利用MB-108使冷腫瘤“變熱”，從而提高MB-101細胞療法的療效。針對上述臨床前研究結(jié)果，Mustang Bio公司計劃在今年晚些時候提交新藥臨床申請，讓我們拭目以待。

突破！實體瘤新型CAR-T細胞只殺傷癌細胞，不傷正常組織

在許多癌癥中，癌細胞表面都有大量特定的蛋白質(zhì)，但是由于該蛋白質(zhì)往往在正常組織中也有少量存在，就會導(dǎo)致CAR-T療法無法更好地區(qū)分癌細胞和正常組織，從而導(dǎo)致在治療時正常的細胞和器官遭受攻擊，進而導(dǎo)致與治療相關(guān)的致命不良反應(yīng)。因此，基于腫瘤相關(guān)抗原開發(fā)的CAR-T療法容易引起一些擔憂。 基于此，2022年3月21日，美國賓夕法尼亞大學(xué)佩雷爾曼醫(yī)學(xué)院的華人學(xué)者及其研究團隊發(fā)現(xiàn)了一種新的腫瘤抗原CDH17，它是從一種源自美洲駝的納米抗體中鑒定出來的腫瘤抗原。值得一提的是，CDH17在腫瘤組織和健康組織中都有表達，但靶向CDH17的CAR-T細胞僅僅殺傷癌細胞，并不會傷害正常組織，因為CDH17被隔離并隱藏在正常細胞之間。這項研究中更是有“CAR-T之父”Carl June參與其中！

這項研究的結(jié)果針對神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中的 CDH17，表明腫瘤中的 CAR-T 細胞可接觸到一類新的腫瘤相關(guān)抗原，但與健康組織中的CAR-T細胞隔離。

在CAR-T治療實體瘤方面，找到不影響健康組織的特異性靶標十分困難，缺乏合適的靶標是該領(lǐng)域面臨的一大阻礙。CDH17雖然也在健康細胞中表達，但健康細胞僅限于人和小鼠小腸和結(jié)腸上皮細胞。

為此，該團隊還對CDH17 CAR-T是否會殺死健康的小腸或結(jié)腸上皮細胞進行了研究。研究結(jié)果顯示，雖然CDH17也在正常腸上皮細胞表達，但CDH17 CAR-T細胞不會攻擊正常細胞，這可能是因為CAR-T細胞無法到達或結(jié)合正常腸上皮細胞之間緊密連接的健康組織，從而產(chǎn)生“掩蔽”CAR-T攻擊對健康細胞的影響。

CDH17 CAR-T攻擊癌細胞

總而言之，研究結(jié)果非常具有臨床參考價值，此研究表明， CDH17是神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、胃腸道癌癥和其他表達CDH17實體瘤的有潛力靶點 ，有望進一步作為過繼免疫治療進行開發(fā)。

天價≠神藥！CAR-T療法雖好，但要理性看待！

CAR-T療法作為新型細胞療法，近年來在全球癌癥細胞免疫治療領(lǐng)域，可謂是獨占鰲頭。 但是面對CAR-T療法，大家還需要保持清醒，理性看待！的確有一部分晚期癌癥患者采用CAR-T療法逆轉(zhuǎn)命運。但它并非神藥，在實體瘤的治療上依然充滿挑戰(zhàn)。 而且與其他的抗癌藥一樣，CAR-T療法也有其副作用，例如細胞因子風暴、神經(jīng)毒性、B細胞終身缺失等，但目前已經(jīng)有很好的控制方法，能夠較好地應(yīng)對。 因此，基于不菲的價格和副作用， 通常CAR-T療法被用于標準治療失?。ㄊ中g(shù)、放療、化療、靶向治療、PD-1治療等）的復(fù)發(fā)難治性患者身上。 2021年我國迎來了細胞免疫治療的元年，作為先鋒的CAR-T療法，是未來發(fā)展方向之一。CAR-T療法主要在于改造T細胞來使其識別腫瘤細胞的特殊靶點，理論上，可以有無數(shù)種針對不同靶點的CAR-T療法，這意味著蘊含著無限可能。 希望不久的將來，能夠在國內(nèi)外醫(yī)學(xué)科研工作者的努力下，降低細胞療法，降低價格，突破實體瘤的瓶頸，讓越來越多的晚期癌癥患者獲益！