本試劑盒為一種直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA試劑盒。在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原;加入樣品或標(biāo)準(zhǔn)品,樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的去氫表雄酮與微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶標(biāo)記的去氫表雄酮多克隆抗體,游離的酶標(biāo)記抗體通過洗滌被出去;再加入顯色液,結(jié)合的酶標(biāo)記抗體是無色的顯色液轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,加入反應(yīng)終止液后再轉(zhuǎn)化為黃鱔,在450nm處測(cè)量,樣品吸光值與樣品中的去氫表雄酮含量成負(fù)相關(guān),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出樣品中去氫表雄酮含量。
去氫表雄酮和其他內(nèi)源性類固醇激素的濫用已成為一個(gè)嚴(yán)重的問題,目前已有含DHEA的保健食品出現(xiàn)
操作說明:1. 加試劑盒從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫下平衡30min以上。
2. 加樣:加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品或50μL待測(cè)樣品,然后每孔加入50μL酶標(biāo)記物,輕輕混勻,室溫下孵育30 min。
3 洗板4-5次,每次浸泡30秒,拍干。。
4 顯色:每孔加入底物緩沖液50μl,再加底物液50μl,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境避光顯色10min。。
5.測(cè)定:每孔加入終止液50μl,輕輕振蕩勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè),在20min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測(cè)定吸光度值。