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本試劑盒采用固相酶聯(lián)免疫吸附ELISA原理，通過黃曲霉毒素B1(AFB1)抗原和曲霉毒素B1(AFB1)抗體。
1 . 脂肪含量低的固體樣品（如大米、玉米、小麥和飼料等）

1、稱取5 g 粉碎樣品于100 mL帶塞三角瓶?jī)?nèi)，準(zhǔn)確加入25 mL 60%甲醇水溶液。

2、將加入了甲醇水溶液的樣品放入振蕩器內(nèi)（或用手強(qiáng)力振蕩），充分振蕩3 min后，用濾紙過濾，收集濾液。

3、取濾液2 mL，加入6 mL 20 %甲醇水溶液，混勻，用whatman 1號(hào)濾紙過濾，此為樣品待檢液。

2．醬油、醋

1、稱取5 g樣品于25 mL小燒杯中，用10 mL蒸餾水將試樣轉(zhuǎn)移到125 mL分液漏斗中，加入25 mL三氯甲烷，加塞輕輕振搖3 min，靜置分層。

2、放出下層三氯甲烷層，取5 mL于20 mL蒸發(fā)皿中，65 ℃水浴通風(fēng)揮干。揮干冷卻后，準(zhǔn)確加入5 mL 60%甲醇水溶液，將蒸發(fā)皿中的凝結(jié)物充分溶解。

3、取溶解液2 mL，加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。

3．食用油（如菜油、麻油、色拉油、花生油等）

1、稱5 g油樣于25 mL小燒杯中，用20 mL石油醚或正乙烷分次將試樣轉(zhuǎn)移至125 mL分液漏斗中，準(zhǔn)確加入25 mL 60%甲醇水溶液溶液，加塞輕輕振搖5 min，靜置分層，放出下層60%甲醇水提取液。

2、取提取液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。

4．酒類

1、稱取5 g樣品于125 mL分液漏斗中，加入25 mL三氯甲烷，加塞輕輕振搖3 min，靜置分層。

3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混勻，此為樣品待檢液。

操作說明：

1．將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20-25 ℃）平衡30 min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2．按需要取出微孔條及板架，將不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷凍。

3．加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50 μL /孔，然后加抗體工作液50 μL /孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，室溫下環(huán)境反應(yīng)40 min。

4．洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。

5．加入100 μL酶標(biāo)記物應(yīng)用液到微孔板中，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后，室溫下反應(yīng)20分鐘。

6．棄去孔中的液體，并在吸水紙上拍干，每孔注滿稀釋好的濃縮稀釋液，輕輕振蕩，棄去孔中液體，并在吸水紙上拍干，重復(fù)4次。

7．顯色：每孔加入底物緩沖液50 μL，再加底物液50 μL，輕輕振蕩混勻，室溫環(huán)境下避光顯色10 min。

8．測(cè)定：每孔加入終止液50 μL，輕輕振蕩勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450 nm處（在20 min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測(cè)定吸光度值。

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