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檢測原理
孔雀石綠快速檢測卡應(yīng)用了競爭抑制免疫層析的原理,當(dāng)試紙條插入檢測樣品溶液后,樣品溶液中的孔雀石綠與金標(biāo)抗體相結(jié)合,進(jìn)而封閉金標(biāo)抗體上孔雀石綠的抗原結(jié)合點(diǎn),阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜上孔雀石綠蛋白偶聯(lián)物結(jié)合,使T線顏色無變化;反之,如樣品溶液中沒有孔雀石綠,則不能阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜上的孔雀石綠蛋白偶聯(lián)物結(jié)合,從而T線顯紅褐色。
樣品處理
1. 取一定量的去脂肪組織樣本,用剪刀剪碎;
2. 稱取 2 克 勻質(zhì)樣本于 15 毫升離心管中;
3.用提取劑 1 專用滴管移取 1 毫升提取劑 1 加入到離心 管中,振蕩 30 秒鐘;將提取劑 2 加入到離心管中,振 蕩 30 秒鐘,將提取劑 3 加入到離心管中,劇烈振蕩 2 分鐘;
4. 室溫下 4000 轉(zhuǎn)/分鐘,離心 5 分鐘;
5. 取 3 毫升上清液于新的 5 毫升離心管中,用刻度滴管移取 2 毫升凈化劑加入到離心管中,振蕩 1 分鐘,室溫下 4000 轉(zhuǎn)/分鐘,離心 1 分鐘,棄去上清;
6. 用移液滴管取 2.毫升下層于 5 毫升離心管中,用刻度 滴管移取 1 毫升清潔劑加入到離心管中,振蕩 1 分 鐘,室溫下 4000 轉(zhuǎn)/分鐘,離心 1 分鐘;
7.棄去上層液體,用移液滴管取 1 毫升下層液體于 5ml離心管中,60℃下空氣吹干;
8. 向吹干的離心管中加入 0.3mL 復(fù)溶液,沖洗溶解試管內(nèi)壁上殘留物,吸取 100μl 溶液,待檢。
使用步驟
在進(jìn)行測試前先完整閱讀使用說明書,使用前將試劑板和待檢樣本溶液恢復(fù)至室溫(20℃~30℃)。
1.從原包裝袋中取出試劑板,水平放置于觀察者正面, 如上圖右側(cè)所示(打開后請(qǐng)立即使用);
2.吸取待檢樣品溶液 100 微升于金標(biāo)微孔中,用小滴管 吹打完全溶解孔內(nèi)紅色物質(zhì),等待反應(yīng) 5 分鐘;
3.吸取孔內(nèi)所有溶液滴加到加樣孔(見上圖)中,加樣 后開始計(jì)時(shí);
4. 結(jié)果應(yīng)在 8-10 分鐘讀取,其他時(shí)間判讀無效。
結(jié)果判斷
1.陰性(-):T 線顯色(檢測線,靠近加樣孔一端) 比C 線(對(duì)照線)深或一樣深,表示樣品中待檢
藥物濃度低于檢測限或不含待檢藥物。
2. 陽性(+): T 線顯色比 C 線淺,或 T 線無顯色,表示樣品中待檢藥物濃度高于檢測限,T 線顯色比 C
線越淺,表示樣品中待檢藥物濃度越高。
3.無效:未出現(xiàn) C 線,可能是操作不當(dāng)或試劑板已失 效。應(yīng)再次閱讀說明書,并用新的試劑板重新測試。
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