25-羥維生素D夾心法臨床檢測

目前血清維生素D檢測方法主要為液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）和化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）。國家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《WS/T 677—2020 人群維生素D缺乏篩查方法》推LC-MS/MS為第一方法，化學(xué)發(fā)光免疫法為第二檢測方法。從原理上看，LC-MS/MS是基于被測生物標(biāo)志物本身分子量、結(jié)構(gòu)等化學(xué)性質(zhì)的直接分析方法，具有高靈敏度和高特異性。CLIA是基于抗原抗體反應(yīng)，與LC-MS/MS相比，前處理簡單且檢測自動化程度高。

LC-MS/MS

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）是臨床生化小分子檢測的方法，常用于血清25-羥維生素D（25-OH-VD）的檢測。LC-MS/MS結(jié)合了液相色譜（LC）的物理分離能力和質(zhì)譜（MS）質(zhì)量分析能力，可對未知化合物進(jìn)行定性和定量分析。LC-MS/MS二級串聯(lián)質(zhì)譜分析技術(shù)，可同時利用母離子及碎片離子信息，選擇性地監(jiān)測被定量的化合物，即使是痕量的組分也不受豐量物質(zhì)的干擾。對于小分子分析測定來說，LC-MS/MS具有很高的分析特異性和和檢測靈敏度。

美中不足的是，LC-MS/MS分析結(jié)果易受樣本中目標(biāo)分析物以外的物質(zhì)（包括來源于樣本自身及方法建立過程中外部環(huán)境引入的物質(zhì)）影響。為消除這種基質(zhì)效應(yīng)，提高LC-MS/MS分析結(jié)果的準(zhǔn)確性，樣品需要進(jìn)行嚴(yán)格的前處理。對與尿液、口腔液、血漿等不同臨床驗本中的小分子進(jìn)行檢測時，需要根據(jù)基質(zhì)凈化效果、樣品預(yù)期濃度、低檢出限要求等因素選擇不同的前處理方式，以消除不同物質(zhì)帶來的基質(zhì)效應(yīng)。

化學(xué)發(fā)光競爭免疫檢測

與LC-MS/MS相比，基于抗原-抗體特異性結(jié)合的免疫檢測技術(shù)操作簡單、檢測快速，是VD小分子質(zhì)譜檢測切實可行的替代方法。由于25-OH-VD分子量小，缺乏抗原表位，目前臨床化學(xué)發(fā)光免疫檢測普遍采用的是競爭法。競爭法屬于試劑有限型分析，檢測靈敏度相對較低；交叉反應(yīng)率較高，易出現(xiàn)假陽；在痕量檢測時難以與陰性樣本區(qū)分，在樣本低濃度范圍會產(chǎn)生較大的誤差。大量研究顯示，VD競爭法與質(zhì)譜檢測結(jié)果的相關(guān)性較差，盡管有化學(xué)發(fā)光的加持，檢測結(jié)果也不盡如人意。

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院檢驗科與中日友好醫(yī)院檢驗科血凝室的研究人員液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）方法作為參照標(biāo)準(zhǔn)，比較了雅培、索林、IDS、羅氏、西門子5個廠家的自動化免疫學(xué)方法和測定25-OH-VD結(jié)果的一致性，結(jié)果顯示不同檢測系統(tǒng)檢測結(jié)果相差較大。

小分子非競爭免疫檢測技術(shù)與質(zhì)譜相關(guān)性高達(dá)0.94

為解決免疫檢測技術(shù)在小分子臨床應(yīng)用的技術(shù)難題，提高免疫檢測與質(zhì)譜檢測結(jié)果的一致性，OKAYBIO研發(fā)團(tuán)隊不斷實踐、反復(fù)嘗試，通過調(diào)整免疫策略、優(yōu)化抗體設(shè)計，成功開發(fā)出適用于小分子非競爭免疫分析的抗體。