靶基因甲基化測序(Target-BS)等揭示特應性皮炎新發(fā)現(xiàn)

特應性皮炎（atopic dermatitis，AD）是一種常見的炎癥性皮膚疾病，特征為劇烈瘙癢、復發(fā)性濕疹樣病變和Th2介導的免疫反應。調(diào)節(jié)性T細胞（Regulatory T cell，Treg）在調(diào)控炎癥、抑制Th2細胞(T helper 2 cell)和維持免疫穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。先前的研究對于AD患者中Treg比例存在沖突結(jié)果，一些研究發(fā)現(xiàn)Treg比例未改變，而其他研究則報告Treg數(shù)量增加。

在過敏性疾病中，Treg對Th2細胞的抑制作用被破壞以及Th2型炎癥的促進背后的精確分子機制尚不清楚。因此，探究AD中Treg數(shù)量和功能變化背后的分子機制至關(guān)重要。

 近日，南方醫(yī)科大學皮膚病醫(yī)院梁云生課題組探討了在特應性皮炎（AD）中，Treg數(shù)量和功能變化的分子機制，以及這些變化如何影響Th2型炎癥。

研究通過流式細胞術(shù)、mRNA測序（mRNA-seq）、共培養(yǎng)實驗、共免疫沉淀、染色質(zhì)免疫沉淀和亞硫酸鹽測序（BS-seq）等方法，在體外或AD小鼠模型以及AD患者中研究分子機制。分析結(jié)果表明在輕度和中度AD中檢測到Treg比例增加。而在重度AD患者中，Treg數(shù)量和CTLA-4表達特征性減少則與血清IL-4 (interleukin-4)水平相關(guān)，這與體外高濃度IL-4處理下的驗證分析結(jié)果一致。其背后機制是IL-4/pSTAT6通路招募DNMT1和HDAC2來抑制Foxp3和CTLA-4位點的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。高水平的IL-4破壞了Treg通過CTLA-4介導的Th2細胞分化抑制，而在Treg中阻斷IL-4Rα信號恢復了AD模型小鼠和AD患者的Treg數(shù)量和Th2細胞抑制。 

總之，本研究結(jié)果表明，Treg數(shù)量及AD患者嚴重程度分級與血清IL-4水平相關(guān)。異常高水平IL-4表觀遺傳調(diào)控Treg數(shù)量和CTLA-4表達減少。IL-4誘導Treg上的CTLA-4表達減少損害了Th2細胞分化抑制。 

研究方法 研究隊列：42名AD患者和14名健康志愿者（(healthy volunteers，HVs），以及用于實驗的特定基因敲除小鼠。 通過MC903誘導AD小鼠模型，評估耳厚度和組織學變化。 從人和小鼠樣本中分離和分化細胞，進行Treg抑制實驗和流式細胞術(shù)分析。 使用ELISA和Western blotting技術(shù)分析血清和蛋白表達水平。 

通過亞硫酸鹽測序（Target-BS）和共免疫沉淀實驗分析DNA甲基化和蛋白相互作用。

 進行染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）和RT-qPCR分析特定基因位點的表觀遺傳修飾。