竹葉黃酮抗突變作用的體外實(shí)驗(yàn)研究

【摘要】  目的為了探討竹葉黃酮的保健作用。方法利用鼠傷寒沙門氏菌營(yíng)養(yǎng)缺陷型回復(fù)突變實(shí)驗(yàn)(Ames實(shí)驗(yàn))對(duì)竹葉黃酮進(jìn)行了體外抗突變作用的研究。結(jié)果竹葉黃酮具有顯著的抗突變作用，當(dāng)其劑量為20 mg／平皿時(shí)對(duì)2-AF，B［a］P和AFB1的致突變性抑制率均達(dá)到70.5%以上，并且呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。結(jié)論竹葉黃酮的抗突變作用主要是通過阻斷致突變物使正常細(xì)胞變?yōu)橥蛔兗?xì)胞而實(shí)現(xiàn)的，也包括部分去突變作用，但促進(jìn)突變細(xì)胞修復(fù)的作用不明顯。

【關(guān)鍵詞】  竹葉黃酮 抗突變作用 Ames實(shí)驗(yàn)

　　Abstract:ob[x]jectiveTo discuss the health function of flavonoids from bamboo leaves（FBL）.MethodsAntimutagenicities in vitro of FBL were studied by Ames test.ResultsFBL showed strong antimutagenic activities with inhibition rates of more than 70.5% to B［a］P，2-AF and AFB1 at dose of 20mg/plate.ConclusionThe desmutagenicities and bio-antimutagenicities of FBL coexisted，while the latter is the main way by FBL inhibits me[x]tagena.

　　Key words:Flavonoids from bamboo leaves（FBL）;  Antimutagenicity;  Ames test

    麻竹Dendrocalamus latiflorus又名甜竹、八月麻（福建），屬禾本科牡竹屬，是廣泛分布于我國(guó)福建、臺(tái)灣、廣東、廣西、云南、貴州和四川等南亞熱帶和熱帶地區(qū)的大型叢生竹種［1］。麻竹葉大，寬4～7 cm以上，內(nèi)含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，很值得開發(fā)利用。竹葉在我國(guó)具有悠久的食用和藥用歷史［2,3］。竹葉提取物具有抗自由基、抗氧化、抗衰老、調(diào)節(jié)血脂、阻斷亞硝化反應(yīng)、增強(qiáng)免疫和抗菌抑菌的作用［3］。竹葉中所含的功能因子主要是黃酮糖苷和香豆素類內(nèi)酯等［3］。

　　1  材料與方法

　　1.1  材料

    竹葉：采自四川省遂寧市安居區(qū)麻竹園，經(jīng)四川省遂寧市松濤植物園舒松濤園藝師鑒定為麻竹Dendrocalamus latifl-orus葉。

    實(shí)驗(yàn)菌株：鼠傷寒沙門氏菌組氨酸缺陷型突變株TA97、TA98（移碼型突變株）和TA100（堿基置換型突變株）：均由重慶市疾控中心提供。

    實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠：為BALB/C純系小鼠，♂，♀各半，8～10周齡，體重18～20g，由重慶市中藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

    2-氨基芴(2-AF)，苯并芘(B［a］P)：Sigma公司出品。

    黃曲霉素B1(AFB1)：重慶市計(jì)劃生育科學(xué)研究所提供。

    超濾用聚砜膜（分子截流量50 000 Da），國(guó)家海洋局杭州水處理設(shè)備中心出品。

    其它常規(guī)藥品為化學(xué)純或分析純。

　　1.2  方法

　　1.2.1  竹葉黃酮的制備麻竹葉5 kg，粉碎成粗粉，以80%乙醇回流提取3次，2 h/次。提取液合并后超濾分離，收集清液減壓濃縮，經(jīng)硅膠柱色譜CHCl3-MeOH梯度洗脫，再經(jīng)反復(fù)硅膠或ODS柱色譜分離，得到竹葉黃酮化合物樣品。

　　1.2.2  Ames實(shí)驗(yàn)［4，5］采用Ames標(biāo)準(zhǔn)平板摻入法或稱平皿摻入法。

    致突變性抑制率（％）＝G-H／G-I×

    式中G—致突變陽性對(duì)照組回變菌落數(shù)(用 ±s表示，下同)；

    H—實(shí)驗(yàn)組回變菌落數(shù) ；

    I—溶劑對(duì)照組回變菌落數(shù)。

　　1.2.3  竹葉黃酮抗突變作用機(jī)制實(shí)驗(yàn)［4～7］本實(shí)驗(yàn)以3種方式加入受試物，加入量均為20 mg／平皿，測(cè)試菌株為TA98。

    方式1，將受試物和致突變物同時(shí)加入磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)中，于37℃水浴中預(yù)培養(yǎng)30 min后再加入菌液，以下步驟按“1.2.2”進(jìn)行。

    方式2，將受試物、致突變物及菌液同時(shí)加入含活化酶的磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)中，于37℃水浴中預(yù)培養(yǎng)30 min，以下步驟按“1.2.2”進(jìn)行。

    方式3，將致突變物與菌液同時(shí)加入磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)和活化酶中，于37℃水浴中預(yù)培養(yǎng)30 min，然后離心，棄上清液。沉淀物用磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)洗滌2次。將洗后的帶菌液與受試物混合，以下步驟按“1.2.2”進(jìn)行。

　　1.2.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用DPS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)取3次測(cè)定的平均值。

　　2  結(jié)果與討論

　　2.1  竹葉黃酮體外抗突變作用的劑量-效應(yīng)關(guān)系結(jié)果見表1。表1  竹葉黃酮體外抗突變作用的劑量-效應(yīng)關(guān)系（略）

    回歸方程中y 表示機(jī)率單位（用DPS軟件系統(tǒng)將抑制率轉(zhuǎn)換為機(jī)率單位）；x表示劑量的對(duì)數(shù)值

    由表1可知，在實(shí)驗(yàn)的劑量范圍內(nèi)，竹葉黃酮對(duì)3種致突變物的致突變性抑制的劑量-效應(yīng)關(guān)系經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后，其對(duì)數(shù)劑量-效應(yīng)關(guān)系呈極顯著(P＜0.01)或顯著(P＜0.05)的線性正相關(guān)關(guān)系，說明其劑量-效應(yīng)關(guān)系為對(duì)數(shù)曲線關(guān)系，即隨著連續(xù)等量的遞增每一平皿中受試物的劑量，所引起的抗突變作用逐漸增大，但其效應(yīng)增幅卻都是逐漸減少的。

　　2.2  竹葉黃酮對(duì)3種致突變物致突變的抑制作用由表2可知，在TA97，TA98及TA100中，竹葉黃酮對(duì)3種致突變物的致突變性均有顯著的抑制作用，當(dāng)劑量為20 mg/平皿時(shí)其抑制率均達(dá)到70.5%以上，對(duì)致突變物的致突變性抑制效果順序在TA97菌株為AFB1> B［a］P >2-AF，在TA98和TA100菌株均為B［a］P> AFB1>2-AF。表2  竹葉黃酮對(duì)3種致突變劑致突變性的抑制作用（略）

　　2.3  竹葉黃酮體外抗突變作用的機(jī)制由表3可知，以方式2加入的竹葉黃酮對(duì)3種致突變物的致突變抑制率均高于其它兩種方式，其中又以方式3為低。方式2是將菌液、致突變物與受試物共同進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，這就存在兩種可能性，一是受試物與致突變物作用使其失活(去突變物)，二是受試物阻斷正常細(xì)胞變?yōu)橥蛔兗?xì)胞(生物抗突變物)。方式1的抑制率低于方式2，由此可以看出方式2中生物抗突變作用占主導(dǎo)地位，但也不排除存在去突變作用。以方式3加入受試物的抗突變性顯著低于前兩種，說明受試物促進(jìn)突變細(xì)胞修復(fù)的作用不是竹葉黃酮抗突變作用的主要方式。因此竹葉黃酮的抗突變作用主要是通過抑制突變物對(duì)菌株的致突變作用而實(shí)現(xiàn)的，但也不排除去突變作用。表3  以不同方式加入竹葉黃酮的抗突變作用（略）

　　3  結(jié)論

    竹葉黃酮具有顯著的抗突變作用，當(dāng)其劑量為20 mg/平皿時(shí)對(duì)B［a］P，2-AF和AFB1的致突變性抑制率均達(dá)到70.5%以上，在實(shí)驗(yàn)的劑量范圍內(nèi)，其劑量一效應(yīng)關(guān)系是對(duì)數(shù)曲線關(guān)系。

    竹葉黃酮的體外抗突變作用主要是通過阻斷正常細(xì)胞變?yōu)橥蛔兗?xì)胞而實(shí)現(xiàn)的，也包括部分去突變作用，而當(dāng)細(xì)胞發(fā)生突變后，其促進(jìn)突變細(xì)胞修復(fù)的作用不明顯。

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作者：唐浩國(guó) 向進(jìn)樂