酶標儀參數(shù)及性能檢測

 作者：曾俊，張丹桂，王革非，陳小璇，李康生

【摘要】 目的：檢測Bio_Rad 3550UV型酶標儀是否仍能應(yīng)用于精密的酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA的檢測。方法：對Bio_Rad 3550UV型酶標儀的一些重要參數(shù)(濾光片精度，檢測結(jié)果可重復(fù)性，線性相關(guān)性以及通道間的差異等進行檢測，同時與新型酶標儀作比較。結(jié)果：Bio_Rad 3550UV酶標儀各項重要參數(shù)均符合檢測要求。結(jié)論：Bio_Rad 3550UV酶標儀仍然能應(yīng)用于精密的ELISA檢測。

【關(guān)鍵詞】 酶標儀；性能檢測；參數(shù)檢測

　　酶標儀是實驗室的常用貴重儀器，主要應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA，檢測樣本吸光度值。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，酶免疫分析法的自動化程度及精確性有了很大的提高，其在生物醫(yī)學(xué)和臨床檢驗中的應(yīng)用越來越廣泛。1993年我室購買了Bio_Rad 3550UV酶標儀，我們對該儀器的一些重要參數(shù)(濾光片精度，檢測結(jié)果可重復(fù)性，線性相關(guān)性以及通道間的差異性等進行了檢測，同時與新型酶標儀作了比較。

1 材料與方法

1.1 材料Bio_Rad 3550UV酶標儀(Bio_Rad公司，美國，SPECTRAMAX 190和SPECTRAMAX 340PC酶標儀(MD公司，美國，酶標板(biomat；DU 640紫外可見光分光光度計(BECKMAN公司，美國。重鉻酸鉀：配制質(zhì)量濃度5mg/mL的重鉻酸鉀溶液，再對其進行連續(xù)倍比稀釋得到T1～7，其質(zhì)量濃度分別為5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0.078mg/mL。

1.2 方法

1.2.1 濾光片波長精度檢查 采用高精度紫外可見光分光光度計對不同波長的濾光片進行光譜掃描，所得檢測值與濾光片標定值之差稱為濾光片的精度，精度＜5為正常，差值越接近于零說明精度越高［1］。

1.2.2 儀器的重復(fù)性檢查 對同一孔用450nm波長［2］(參考波長630nm連續(xù)測5次，取高OD值(H、低OD值(L，計算重復(fù)誤差率(dev/%((H_L/(H+L。重復(fù)誤差率應(yīng)≤0.5%。

1.2.3 線性相關(guān)性及通道間差異檢測 取一排潔凈的酶標板條(8個小孔杯，依次加入重鉻酸鉀溶液，每孔100μL，第8孔加入蒸餾水作空白對照。以酶標板架為載體，先后把酶標板條置于8個通道：①線性相關(guān)性檢測：用450nm波長(參考波長630nm對每個通道連續(xù)檢測5次，取均值，對吸光度與稀釋度作線性相關(guān)分析。②通道間差異檢測：取8個通道中的高OD值(H、低OD值(L，計算通道間差異率((H_L/(H+L。通道間差異率應(yīng)≤1.5%。

1.2.4 與新型同類儀器比較 將同一樣本分別在Bio_Rad 3550UV、SPECTRAMAX 190及SPECTRAMAX 340PC酶標儀上檢測，對比分析檢測結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 濾光片波長精度檢查濾光片的精度如何直接影響儀器的靈敏度和檢測結(jié)果。對本儀器的濾光片用分光光度計檢測，濾光片的精度均小于5，說明濾光片質(zhì)量可靠(表1。表1 分光光度計檢測濾光片的精度

2.2 儀器的重復(fù)性檢查

在儀器可測范圍(OD 0.10～2.00內(nèi)重復(fù)性誤差率＜0.5%，在OD值低于0.005時誤差較大(表2。表2 倍比稀釋濃度重鉻酸鉀檢測儀器的重復(fù)性

2.3 線性相關(guān)性及通道間差異檢測

以質(zhì)量濃度為橫坐標，吸光度(OD值為縱坐標，線性方程為y=0.351x+0.032，r=0.998。通道間差異率(表3可見通道間的差異與吸光度相關(guān)，在儀器的佳測量范圍(OD值0.15～1.50內(nèi)通道間差異率低于1.5%［1］。表3 同一酶標條在不同通道間的OD值 *在同一通道上連續(xù)測5次后取均值

2.4 與新型同類儀器比較

對所測數(shù)據(jù)作統(tǒng)計學(xué)處理，在OD值(0.15～1.50范圍內(nèi)3臺儀器間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(圖1。圖1 三臺儀器對同一樣本的檢測值

　　3 討論

我們采用的是雙波長檢測，參考波長630nm。因為在用單一波長檢測時各孔間的差異較大(數(shù)據(jù)未列出，與報道一致［3］。通過與新型酶標儀比較，可知本儀器的OD值在0.10～1.50，檢測結(jié)果比較準確。這與儀器的檢測原理(Bouger_amberT_beer法則相符。根據(jù)對我室1993年購置的Bio_Rad 3550UV酶標儀各項重要參數(shù)檢測結(jié)果及與二臺新型酶標儀結(jié)果比較表明，Bio_Rad 3550UV酶標儀仍然能應(yīng)用于精密的ELISA檢測。

【參考文獻】
［1］成軍， 孫關(guān)忠， 鄭懷競, 等．酶標儀性能評價與鑒定的基本方法及其初步應(yīng)用［J］． 中華醫(yī)學(xué)檢驗雜志, 1998, 21(1: 50-51.

［2］苗麗， 楊冀洲， 王麗． 酶標儀自校驗方法探討［J］． 中國國境衛(wèi)生檢疫雜志, 2003, 26(4: 234-236.

［3］羅雙龍． 酶標儀雙波長與單波長比色測定抗HCV的比較［J］． 臨床檢驗雜志, 1998, 16(6: 351.