石蠟切片、冰凍切片及振動切片的區(qū)別

        一、石蠟切片 
        把修好的蠟塊裝在旋轉(zhuǎn)切片機上，即可進行切片(section)。切片必須保持切片刀銳利，切片厚度通常為5～7um，也可根據(jù)染色需要切成不同厚度，一般不旋轉(zhuǎn)式切片機超過10um。切好的蠟帶，放人40℃左右的溫水中將蠟片展平。良好的切片應(yīng)無刀痕、裂痕，切片厚度均一平整。切片如有上述問題，在進行免疫組織化學(xué)染色時會出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象。為能得到平整無皺褶的組織切片?？刹捎脙纱握蛊?，即先將組織切片漂浮在30％的乙醇溶液中進行次展片，然后將切片撈起，再次放人45～50℃的水浴中進行第二次展片，乙醇的濃度和水溫可視組織不同和石蠟熔點的高低自行調(diào)整。此過程是利用乙醇溶液與水之間的張力差展開切片的皺褶。為防止脫片，載玻片要涂黏片劑。對HE染色的切片，可在載玻片上涂抹薄層蛋白甘油，但蛋白甘油因含蛋白易導(dǎo)致非特異性免疫反應(yīng)，故用于免疫組織化學(xué)染色的切片常用多聚賴氨酸、3—氨丙基—乙氧基甲硅烷等處理。 
        二、冰凍切片 
        冰凍切片(fiozen section)是酶組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)染色中常用的一種切片方法，其突出的優(yōu)點是能夠較完好地保存細胞膜表面和細胞內(nèi)多種酶活性以及抗原的免疫活性，尤其是細胞表面抗原更應(yīng)采用冰凍切片。新鮮組織和已固定的組織均可作冰凍切片。為了得到高質(zhì)量的冰凍切片，選擇好的冰凍切片機和配套的切片機(vibratome)可以把新鮮組織(不固定、不冷凍)切成20～400pm的厚片，以漂浮法在反應(yīng)板內(nèi)進行組織化學(xué)或免疫組織化學(xué)染色。因組織不冷凍，無冰晶形成也無組織抗原破壞，染色前又避免了組織脫水、透明、包埋等步驟對抗原的損害，故能較好地保留組織內(nèi)脂溶性物質(zhì)和細胞膜抗原。振動切片主要用于顯示神經(jīng)系統(tǒng)抗原分布的研究。對于柔軟的胚胎腦組織，可用低熔點(45—55℃)10％瓊脂糖包埋，振動切片機切成厚片(40—100gm)，采用漂浮法在反應(yīng)板內(nèi)進行免疫熒光組織化學(xué)染色，激光掃描共聚焦顯微鏡觀察。