血細胞分析儀檢測方法與原理

1、電阻抗、高頻電導及激光散射聯(lián)合檢測法
　　 這是Coutler公司1987年推出的新技術，血球懸浮在電解液中，用一定的電流通過傳感器的內外兩個電極，由于血細胞電阻抗很大，當血細胞通過兩個電極時，電極間阻抗瞬間增大，形成幅度與血細胞體積成正比的電 脈沖，根據脈沖的大小可測出細胞的體積。在測量紅細胞時，利用一個脈沖甄別器，將幅度較小的血小板脈沖去掉，保留紅細胞和白細胞脈沖，因血液中白胞的數量不及紅細胞的1/500，故其總數據近似認為是對紅細胞計數。在測量白細胞時，利用溶血素，使紅細胞溶解，再對剩下的白細胞計數。在對血小板計數時，調低脈沖甄別器的閾值，計出總數，減去紅細胞 的計數（其中已包括白細胞的計數），即為血小板計數。由于不同類型但體積相同的細胞產生的脈沖幅度相同，故僅靠體積是不能完全區(qū)分.
利用高頻電導法和激光散射分析白細胞內部結構可以彌補這一缺陷。雖然細胞壁不能使低頻電流通過，但 能通過高頻電流，細胞核的大小和密度不同，它們對高頻電流的阻抗也不同，因此可用來區(qū)分白細胞。
激光散射技術主要用來檢查細胞膜表面特征和內部結構。激光散射對細胞顆粒的結構和密度的區(qū)分能力強，粗顆粒產生的光散射比細顆粒強，借此可將粒細胞區(qū)分開來，美國COULTER公司的STKS、MAXM系列血細胞分析儀
五分類就是利用電阻法、高頻電導及激光散射聯(lián)合檢測法。
2、光散射和細胞化學染色聯(lián)合檢測法
　　 利用激光散射和過氧化物酶染色技術進行細胞分類。嗜酸性粒細胞有很強的過氧化氫酶活性，中性粒細胞漿內含有較為豐富的過氧化氫酶，單核細胞次之，原始細胞則極少，而淋巴細胞和嗜堿性細胞則缺管此酶。使用微量血液經與含有清洗劑和甲醛的高滲液體進行適當稀釋并孵育幾十秒鐘，此時細胞被清洗劑所破壞，白細胞漿內酶固定，此后繼續(xù)再進行第二次反應，加入過氧化氫和四氫一萘酚加熱，此時待測細胞中過氧化氫酶分解過氧化氫產生氧，后者使四氯一萘酚顯色并沉淀定位于含酶的顆粒中，此類細胞經激光束，由于光散射及細胞大小不同 而被分類。顯然暑堿性細胞、淋巴細胞、原始細胞由于不含此酶，不能被檢測，因此一些儀器專門設置了嗜堿性 細胞檢測系統(tǒng)，它的測量通道采用時間差的方法，與RBC/PLT的測量系統(tǒng)共用一個通道。由于試劑的作用，血液中 除嗜堿性細胞外，其它細胞均被溶解。嗜堿性細胞隨同其它細胞裸核量產生細胞分布圖。完整的嗜堿性細胞呈高 狹角散射，定位于圖上半部，裸粒位于下半部，不同裸粒因結構不同，在X軸分布不同。單個核位于左方，分葉 越多越靠右方。計算機分析分葉核與單個核角散射峰比例，其比值即為分析儀所報告的結果。
TECHNICON H系列分析儀采用的就是這種技術。
3、電阻抗和射頻電導聯(lián)合檢測法
　　 這種方法是分別采用四個檢測系統(tǒng)來檢測不同類型的細胞
①淋巴細胞、單核細胞和中性粒細胞檢測系統(tǒng)：在細胞懸浮淮中加入溶血劑使紅細胞溶解，而使白細胞保持完整，細胞漿及核形態(tài)近似于生理狀態(tài)，當這些細胞通過檢測系統(tǒng)時，對白細胞進行電阻抗法（測量細胞體積）和射頻電導法（檢測細胞核和顆粒密度）的聯(lián)合檢測，結果將細胞分成淋巴細胞、單核細和中性粒細胞三個群體。
②嗜酸性細胞和嗜堿性細胞兩種檢測系統(tǒng)：在細胞懸浮淮中加入特殊的溶血劑，除嗜酸性細胞和嗜堿性細胞外，其他細胞均被溶解或萎縮，再對保持完整的嗜酸性細胞或嗜堿性細胞進行計數。
③幼稚細胞檢測系統(tǒng)：在細胞懸浮淮中加入硫化氨基酸，由于占位不同，結合在幼稚細胞的氨基酸比成熟細胞多，且對溶血劑有抵抗作用，當加入溶血劑時，成熟細胞被溶解，只保留著可能存在的幼稚細胞用來計數。
　　 目前日本東亞公司的NE1500、SYSNEX公司的SE9000血細胞分析儀就是采用這種方法進行五分類的。
4、多角度激光偏振光散射檢測法
采用這種技術的儀器使用鞘流淮將標本血稀釋，稀釋后白細胞的內部結構近似于自然狀態(tài)，只有嗜堿性細胞由于其吸濕的特性而使細胞結構有輕微改變。紅細胞內的血紅蛋白在高滲透壓的作用下，從細胞中分離出來。而鞘流的水份則進入紅細胞內，使細胞膜結構仍然完整，它與鞘流的折光系數相同，不影響白細胞的檢測。儀器同時從四個角度來檢測通過激光束的細胞所產生的散射光，0°前角散射光用來測定細胞的體積，10°狹角散射光用來測定細胞結構，90°垂直散射光對細胞內部顆粒及細胞質進行測量，90°消偏振光散射將嗜酸性細胞從中性粒細胞和其它細胞中分離出來。
ABBOTT公司的CD-3000，CD-3500血細胞分析儀采用了此技術。
　　 利用上述方法進行五分類的儀器，終結果均呈現(xiàn)在高分辨率的白細胞分布圖上。運用計算機圖象技術，以各種彩色象素代表一定的細胞濃度，使細胞亞群和異常情況易于識別，可以從三維空間的不同方位觀察分離的白細胞亞群。通過某種操作，使三維軸旋轉，就可展示不同方位的細胞分布情況。