P16蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其臨床意義

李小鋼　付靜　趙克熹　史春祥
　　【摘要】　目的　探討P16蛋白在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)及癌旁組織中的表達(dá)及臨床意義。方法　采用SP免疫組化方法測定P16蛋白在64例NSCLC及癌旁1～2cm組織中的表達(dá)。結(jié)果　P16蛋白的陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞胞漿，部分同時(shí)出現(xiàn)于胞核。P16蛋白在NSCLC中的表達(dá)率為40.6%，在癌旁組織中的表達(dá)率為74.4%，與NSCLC的分化程度及患者術(shù)后生存期有關(guān)(P＜0.05)，而與組織學(xué)類型及有無局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯關(guān)系(P＞0.05)。結(jié)論　P16蛋白表達(dá)缺失可作為臨床判斷NSCLC的分化程度及預(yù)測患者預(yù)后的參考指標(biāo)。 　　

【關(guān)鍵詞】　非小細(xì)胞肺癌　　P16蛋白　　免疫組化

The ex[x]pression of P16 protein in non-small cell lung cancer and its clinical significance

Li Xiaogang　Fu Jing　Zhao kexi
（Department of Thoracic Surgery,Haidian Hospital,Beijing 100080）
【Abstract】　ob[x]jective　To elucidate the ex[x]pression of P16 in non-small cell lung cancer (NSCLC) and the tissue adjacent to carcinoma and its clinical significance.Methods　Streotavidin perxidase immunohistochemical staining method was used to examine the ex[x]pression of P16 in 64 NSCLC and the tissue adjacent tocarcinoma.Results　The ex[x]pression of P16 protein was mainly located in cytoplasmin.The positive rate of P16 protein in NSCLC was 40.6%,much lower than 74.4% in the tissue adjacent carcinoma.The positive rate of P16 protein was related to the degree of differentiation and prognosis (P＜0.05),but it not correlate with lymph node me[x]tastasis and histologic type (P＞0.05).Conclusions　The absence of P16 protein ex[x]pression may be con-sidered as a parameter for judging the degree of differentiation of NSCLC and clinical prognosis.
　　【Key words】　NSCLC　　P16 protein　　Immunohistochemistry

　　P16基因是近年來發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤抑制基因，其與腫瘤發(fā)生的關(guān)系在已有的多種腫瘤的研究中已得到證實(shí)。我們用SP免疫組化方法，探討P16基因編碼的P16蛋白在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)及癌旁組織中的表達(dá)及其臨床意義。
材料與方法
　　1.收集本院及中日友好醫(yī)院病理科1992年7月至1998年8月手術(shù)切除之肺癌標(biāo)本，經(jīng)病理證實(shí)為原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌，其中鱗癌41例，腺癌17例，腺鱗癌6例。 　　

　　2.方法：免疫組化采用SP方法，P16單克隆抗體和SP試劑盒均為北京中山生物技術(shù)公司提供的ZYMED公司產(chǎn)品。P16抗體稀釋度為1∶100，切片經(jīng)0.4%胃酶消化及枸櫞酸鹽緩沖液抗原修復(fù)后，按SP法染色。 　　

　　3.結(jié)果判斷：以細(xì)胞出現(xiàn)明顯棕色為陽性，陽性細(xì)胞＜25%為(-)，陽性細(xì)胞＞25%為(+)。 　　

　　4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用χ2檢驗(yàn)。
結(jié)　　果
　　1.P16蛋白的表達(dá)：陽性物質(zhì)主要定位于胞漿，部分出現(xiàn)于胞核。 　　2.P16蛋白在NSCLC中的表達(dá)，見表1。
表1　P16蛋白在NSCLC中的表達(dá)(例)

 

組織學(xué)類型 例數(shù) P16(+) P16(-) 陽性率(%)
腺　癌 17 　8 　9 47.1
鱗　癌 41 15 26 36.7
腺鱗癌 　6 　3 　3 50.0
合　計(jì) 64 26 38 40.6

　　　　P＞0.05
　　64例NSCLC中，P16蛋白的陽性表達(dá)率為40.6%，各組織學(xué)類型間無顯著性差異(P＞0.05)。 　　3.癌旁1～2cm處支氣管腺體及粘膜上皮細(xì)胞P16蛋白表達(dá)率為74.4%(32/43)，明顯高于P16蛋白在NSCLC中的表達(dá)。 　　4.P16蛋白的表達(dá)與NSCLC分化程度的關(guān)系，見表2。 表2　P16蛋白的表達(dá)與NSCLC組織學(xué) 分級的關(guān)系(例)

 

組織學(xué)分級 例數(shù) P16(+) P16(-) 陽性率(%)
高分化 16 10 　6 62.5
中分化 24 11 13 45.8
低分化 24 　5 19 20.8
合　計(jì) 64 26 38 40.6

　　　　P＜0.05
　　P16蛋白的表達(dá)隨NSCLC分化程度的降低而降低，有顯著性差異(P＜0.05)。 　　5.P16蛋白的表達(dá)與NSCLC患者術(shù)后生存期的關(guān)系，見表3。 　　64例NSCLC中有3年以上隨訪資料的有33例，如表3顯示，P16蛋白的表達(dá)與肺癌患者術(shù)后生存期呈正相關(guān)，術(shù)后生存期長的患者中，P16蛋白陽性表達(dá)高(P＜0.05)。 　　6.P16蛋白的表達(dá)與NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，見表4。 表3　P16蛋白表達(dá)與NSCLC患者術(shù)后 生存期的關(guān)系(例)

 

術(shù)后生存期 例數(shù) P16(+) P16(-) 陽性率(%)
＜1年 　5 　0 　5 0
1～3年 16 　5 11 32.2
＞3年 12 　9 　3 75.4
合　計(jì) 33 14 19 42.4

　　　　P＜0.05
表4　P16蛋白的表達(dá)與NSCLC局部淋巴結(jié)
轉(zhuǎn)移情況的關(guān)系(例)

 

淋巴結(jié)情況 例數(shù) P16(+) P16(-) 陽性率(%)
有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 25 11 14 44.0
無淋巴經(jīng)轉(zhuǎn)移 26 　9 17 34.6
合　計(jì) 51 20 31 39.2

　　　　P＞0.05
　　64例NSCLC中，資料提示了淋巴結(jié)情況的有51例，表4提示肺癌組織P16蛋白的表達(dá)與局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間無顯著相關(guān)性(P＞0.05)。
討　　論
　　P16基因于1993年由Serrano等［1］發(fā)現(xiàn)并被克隆成功，它編碼的P16蛋白可以與CDK4/Cyclin D復(fù)合物競爭性結(jié)合，從而抑制CDK4/Cyclin D復(fù)合物的活性，阻止細(xì)胞周期從G1期向S期過渡，在正常細(xì)胞周期中起負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用。當(dāng)P16基因突變或丟失時(shí)，P16蛋白的合成發(fā)生障礙，能引起細(xì)胞生長失控，導(dǎo)致癌變［2，3］。 　　肺癌是常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率及死亡率都很高。NSCLC占全部肺癌的75%～90%。以往的研究表明，P16基因的突變和丟失在NSCLC的形成及進(jìn)展中起著較重要的作用，但不是早發(fā)事件［4］。我們應(yīng)用免疫組化SP方法研究了P16蛋白在人原發(fā)性NSCLC及癌旁1～2cm肺組織的表達(dá)，并分析其與臨床病理相關(guān)性，結(jié)果表明：P16蛋白表達(dá)率在NSCLC中明顯低于癌旁組織，且與NSCLC的分化程度呈正相關(guān)，此結(jié)論與國內(nèi)同類報(bào)道相符(P＜0.05)［5～7］；NSCLC各組織學(xué)類型間P16蛋白的陽性表達(dá)無顯著性差異(P＞0.05)；伴或不伴局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC P16蛋白的陽性表達(dá)無顯著性差異(P＞0.05)；在NSCLC預(yù)后方面，我們的研究顯示：P16蛋白的表達(dá)率與NSCLC患者的術(shù)后生存期顯著相關(guān)，術(shù)后生存3年以上的患者組肺癌組織中P16蛋白的陽性表達(dá)率明顯高于1～3年和1年以下患者組，三組間有顯著性差異(P＜0.05)。 　　綜上所述，本研究提示：①P16蛋白主要定位于細(xì)胞的胞漿，部分同時(shí)出現(xiàn)于胞核；②P16蛋白表達(dá)缺失與NSCLC的發(fā)生及細(xì)胞分化不良有關(guān)；與NSCLC患者術(shù)后生存期有關(guān)，可作為臨床判斷NSCLC的分化程度及預(yù)測患者預(yù)后的參考指標(biāo)；③P16蛋白的表達(dá)缺失與NSCLC的組織學(xué)類型及有無局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系不明顯。
李小鋼（北京市海淀醫(yī)院胸外科　郵政編碼 100080） 付靜（北京市海淀醫(yī)院病理科　郵政編碼 100080） 趙克熹（北京市海淀醫(yī)院胸外科　郵政編碼 100080） 史春祥（北京市海淀醫(yī)院病理科　郵政編碼 100080）
參　考　文　獻(xiàn)
1，Serrano M,Hunnon GJ,Beach DA.A how regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of Cyclin D/CDK4.Nature,1993,366:704.
2，趙溫利，郭衛(wèi)星，田志剛.腫瘤抑制基因P16的研究進(jìn)展.國外醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)分冊，1997，24：199.
3，溫桂蘭，范希光，饒緯華.腫瘤抑制基因CDKN2與肺癌.中華結(jié)核與呼吸雜志，1998，21：198.
4，李偉峰，趙　彤.P16基因與肺癌.國外醫(yī)學(xué)呼吸系統(tǒng)分冊，1997，17：5.
5，戰(zhàn)雪梅，孫崇偉，王國新，等.肺癌P16蛋白表達(dá)及臨床意義.診斷病理學(xué)雜志，1998，5：89.
6，張尚福，張　聲，李　羽，等.肺癌中P16蛋白表達(dá)的意義.中華腫瘤雜志，1997，19：259.
7，姜彥多，夏書月，戴曉淳，等.肺癌CDKN2基因產(chǎn)物表達(dá)的研究.中華結(jié)核和呼吸雜志，1996，19：81.