苯丙酮尿癥患者32例家系基因突變研究 2

輕度PKU AV =4，輕度HPA AV =8。再通過(guò)2個(gè)基因突變的AV總和值，對(duì)生化表型進(jìn)行 PKU預(yù)測(cè)：AV為2時(shí)為經(jīng)典型，AV為3和4時(shí)為中間型，AV為5、6和8時(shí)為輕型，AV為9、10、12和16時(shí)為輕度高苯丙氨酸血癥( MHP)。

2結(jié)果
2.1患兒PAH基因突變位點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果   32例PKU患兒共檢測(cè)出61個(gè)突變位點(diǎn)，33種突變基因，突變檢出率為95.31010（61/64個(gè)），其中30個(gè)缺失突變(49.2%)． 16個(gè)剪接突變( 26.2%)，14個(gè)無(wú)義突變(23.0%)，個(gè)缺失突變(1.60/0)。本研究發(fā)現(xiàn)4個(gè)新的突變基因位點(diǎn)，分別為c．699C>G，c．265C>T，c．722G>A和 c．1194A>G。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 32例家系樣本驗(yàn)證情況  對(duì)32例PKU患兒及其父母的血液PAH基因檢測(cè)結(jié)果顯示，27例患兒的2個(gè) 致病突變位點(diǎn)皆遺傳自父母。1例家系樣本由于缺少父親血液樣本，故只檢測(cè)到患兒和母親的突變位點(diǎn)（其中 患兒的2個(gè)致病突變位點(diǎn)中，有1個(gè)致病突變位點(diǎn)遺傳 自母親）。4例家系樣本中只檢測(cè)到患兒和父親或母親一方的部分突變位點(diǎn)。 表1無(wú)錫地區(qū)苯丙酮尿癥人群苯丙氨酸羥化酶基因突變類(lèi)型Table l Mutation of phenylanine hydroxylase gene identified with phenylketonuria public in Wuxi region
2.3基因型與表型的關(guān)系  部分突變類(lèi)型無(wú)AV評(píng)分， 32例中僅21例采用AV評(píng)分法行基因型預(yù)測(cè)生化表型。21例通過(guò)AV預(yù)測(cè)的表型與實(shí)際生化表型的一致 率為38.0%（8/21例），其中預(yù)測(cè)表型為中重度的與實(shí)際生化表型的一致率為92.3%(12/13例），輕度的與實(shí)際生化表型的一致率為50. O%（4/8例）。結(jié)果見(jiàn)表2。

 3討論
PKU的致病基因PAH由編碼區(qū)的13個(gè)外顯子和非編碼區(qū)的12個(gè)內(nèi)含子組成，當(dāng)編碼區(qū)及其兩側(cè)內(nèi)含子有基因突變發(fā)生時(shí)，會(huì)引起PAH的功能減低或缺失， 從而導(dǎo)致相應(yīng)的臨床表現(xiàn)。中國(guó)人PAH基因突變集中在外顯子3、6、7、11與12，其中以外顯子6和7發(fā)生突變?yōu)槎嘁?jiàn)[9-12]，本地區(qū)PKU患兒常見(jiàn)致病突變位點(diǎn)為：c.721C> T,c. 1068C> A,c.611A> G,c. 1197A>T,c.728G>A，e.331C >T和c.442-IG>A，較常見(jiàn)突變位點(diǎn)為：

c.1223G>A，c．781C>T，c.770G>rr和c.1238G>C，與文獻(xiàn)報(bào)道的中國(guó)漢族人、北方人PKU突變圖譜結(jié)果相符合[6,13]。這些突變位點(diǎn)主要分布在外顯子3（6例）、6（6例）、7（18例）、11（12例）、12（5例）卜，其中以外顯子7上基因突變?yōu)榧?，突變頻率高的基因是c.721C >T(ll%)，第2位的是c.728C>A(50/0)。本研究還發(fā)現(xiàn)4個(gè)新的突變基因位點(diǎn)，分別為c. 699C>G、c.265C >T、c.722G>A和c.1194A>G。其中c.699C>G位點(diǎn)為報(bào)道，經(jīng)過(guò)相關(guān)查詢(xún)?cè)赑AHdb及人類(lèi)基兇突變數(shù)據(jù)庫(kù)(HGMD)均未有相關(guān)記載，該突變發(fā)生在編碼區(qū)，改變了氨基酸的構(gòu)成，作者認(rèn)為其可能與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，具體該新突變對(duì)PAH蛋白功能的影響，需要將其在體外表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)，以定性定量地判斷突變對(duì)酶活性的影響，這將足下一步的T作計(jì)劃。而c．265C >T、c．722G>A和c．1194A>G位點(diǎn)為漢族人口中發(fā)現(xiàn)報(bào)道，豐富了我國(guó)PAH基因突變數(shù)據(jù)庫(kù)。

PKU患兒遺傳基因來(lái)源于父母雙方各自攜帶的致病基因，通過(guò)家系樣本驗(yàn)讓的方法，對(duì)可能的致病突變位點(diǎn)進(jìn)行研究，有助于盡早發(fā)現(xiàn)患兒的致病位點(diǎn)，為盡早確診和治療提供條件，尤其在罕見(jiàn)突變?yōu)辄c(diǎn)和新致病位點(diǎn)發(fā)現(xiàn)中起很大作用。本研究采用家系驗(yàn)證的方法提示PKU患兒PAH基因突變絕大多數(shù)分別來(lái)自父母雙方，但也有例外，患者只與父親或母親一方有相同的突變位點(diǎn)，而父母另一方未找到突變位點(diǎn)，且患者表現(xiàn)為巾重度PKU，而父親或母親為健康表型，認(rèn)為除PAH基因型是決定PKU生化代謝表型的重要因素外，還存在一些其他修飾因子的作用，需進(jìn)一步研究證實(shí)。

 目前主要通過(guò)新生兒遺傳代謝病篩查早期確診PKU患者，早期開(kāi)始低PHE飲食治療，將血PHE水平維持在理想范圍，但是由于存在個(gè)體差異，每個(gè)患兒從確診到獲得佳治療方案通常要經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的摸索，這期間常會(huì)出現(xiàn)血PHE水平異常波動(dòng)，對(duì)患兒產(chǎn)生不利影響。本研究顯示通過(guò)AV預(yù)測(cè)中重度PKU基因型和表型有較好的一致性，可為臨床制定PKU患者個(gè)體化治療方案提供重要的理論依據(jù)，與天津的一項(xiàng)研究相似[14]本研究也發(fā)現(xiàn)部分患者基因型和臨床嚴(yán)重度不相符，特別是輕度PKU患者，可能與PKU臨床嚴(yán)重度不儀與突變位點(diǎn)有關(guān)，同時(shí)還受其他一些因素的影響[15]。 本研究采用下一代測(cè)序技術(shù)，并結(jié)合家系驗(yàn)證的方式，為后期PKU患者的基因確診和治療提供了很好的技術(shù)方法和思路，也為本地區(qū)PKU的分子流行病學(xué)研究和預(yù)防提供了理論依據(jù)。

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