臍帶血血紅蛋白電泳聯(lián)合基因檢測β-珠蛋白生成障礙性貧血的診斷價(jià)值

2.2臍帶血Hb A值在不同類別的多重比較結(jié)果各組HbA值統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,正常組、β珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者、β-珠蛋白生成障礙性貧血中重型各組均值分別為(7.54±3.04)%、(3.74士2.18)%、（0.39士0.83）%，多重比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<O．O01)。見圖1。

2.3各組佳Hb A截?cái)嘀到Y(jié)果比較采用ROC曲線分析β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者、p-珠蛋白生成障礙性貧血中 重型胎兒篩查的截?cái)嘀导皩?yīng)的特異性和敏感性，選出佳指標(biāo)。β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者ROC曲線下面積(AUC)為0. 893，佳截?cái)嘀禐?.15%，敏感性83. 9%，特性 82.3%；8_珠蛋白生成障礙性貧血中重型者AUC為1.000，佳截?cái)嘀禐?.2%，敏感性100.0%．特異性99.4%。

3討 論 β-珠蛋白生成障礙性貧血重型患兒出生后6—24個(gè)月發(fā) 病，而中間型患兒在2歲以后發(fā)病，我國p_珠蛋白生成障礙性 貧血的診斷主要依靠成人Hb A值及基因診斷，其產(chǎn)前診斷則 主要是運(yùn)用PCR相關(guān)技術(shù)從胎兒絨毛、羊水細(xì)胞提取的DNA并聯(lián)合父母基因型進(jìn)行基因診斷[10-11]。目前絨毛取樣是較早的產(chǎn)前診斷方式，在孕9周左右就可得到基因診斷結(jié)果。PCR技術(shù)敏感性較高，微量DNA標(biāo)本就可獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果[12]。但是由于產(chǎn)前標(biāo)本取樣的特殊性及實(shí)驗(yàn)條件等影響，存在胎兒基因母血污染、等位基因脫扣等漏檢、誤檢風(fēng)險(xiǎn)。因此胎兒臍帶血Hb分析聯(lián)合基因診斷技術(shù)可提高產(chǎn)前診斷的敏感性和特異性。

 β珠蛋白肽鏈在胎兒3個(gè)月時(shí)開始出現(xiàn)，與a一珠蛋白肽鏈 構(gòu)成Hb A，是胎兒出生前的Hb組分之一。隨著p-珠蛋白出生前后開始表達(dá)并逐漸增強(qiáng)，Hb A也逐漸取代Hb F成為成 人主要的Hb[4]。因此胎兒臍帶血Hb電泳Hb A值可早期輔助診斷β-珠蛋白生成障礙性貧血。本研究337例正常胎兒臍帶血Hb A平均值為（7.54士3.04）%，β-珠蛋白生成障礙性 貧血攜帶者為(3. 74±2.18)%，中重型為(0. 39±0.83)%．各組兩兩之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<O. O01)，說明胎兒時(shí)期β基因突變可導(dǎo)致p-珠蛋白鏈合成降低，使Hb A值較正常胎兒明顯減少。對異常Hb E攜帶者，可在臍帶血中檢出異常Hb E，但敏感性較低。

本研究采用ROC曲線分析并計(jì)算AUC，評價(jià)臍血Hb電 泳對β-珠蛋白生成障礙性貧血診斷的準(zhǔn)確性，AUC越接近1說明診斷效果越好。再結(jié)合敏感性與特異性，對每個(gè)截?cái)嘀颠M(jìn)行分析，從中選出佳指標(biāo)，即大約登指數(shù)對應(yīng)的cut off值。臍血Hb電泳對β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者診斷的AUC為0.893，佳截?cái)嘀禐?.15%，敏感性83. 9%，特異性 82.3%；其中中重型者AUC為1.000，佳截?cái)嘀禐?.2%，敏感度100. 0%，特異性99.4%。本研究結(jié)果顯示，南寧地區(qū)胎兒臍帶血篩查及基因分布情況，與成人β-珠蛋白生成障礙性貧血基因型分布相符[2]。

綜上所述，產(chǎn)前診斷是有效控制中重型珠蛋白生成障礙性 貧血患兒出生的重要手段。本研究結(jié)果表明，臍帶血Hb電泳分析可有效輔助診斷β-珠蛋白生成障礙性貧血。臍帶血Hb電泳組分分析不僅可鑒定母血污染，利用Hb A截?cái)嘀狄部捎行нM(jìn)行初步篩查，降低產(chǎn)前診斷的漏檢率。對無條件開展基因診斷的基層醫(yī)院，可應(yīng)用臍血Hb電泳初步篩選可疑患者，并做進(jìn)一步檢測。
參考文獻(xiàn)
[1] Giordano PC. Newborn screening for hemoglobinopathies2013,919(23):131-145.
[2] Xiong F,Sun M,Zhang X,et al.Molecular epidemiological survey of haemoglobinopathies in the Guangxi Zhuang Autonomous Region of southern China[J]. Clin Genet,2010,78(2)：139-148.
[3]徐湘民．地中海貧血預(yù)防控制操作指南[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2011.
[4] Kazazian HH. The thalassemia syndromes:molecular basis and prenatal diagnosis in 1990[J]. Semin Hematol,1990,27(3)：209-228.
[5] Srivorakun H,Fucharoen G,Sae-Ung N,et al. Analysis of fetal blood using capillary electrophoresis system:a simple method for prenatal diagnosis of severe thalassemia diseases[J]. Eur J Haemat01,2009 ,83 (1):57-65.
[6]郭浩，杜麗，唐斌，等，臍血血紅蛋白電泳在新生兒地中海貧血篩查中的應(yīng)用[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2014, 30 (12)：1953-1955.
[7]李繼慧,張炬光,鄧國生.應(yīng)用臍帶血電泳篩查新生兒a-地中海貧 [J].中國優(yōu)生與遺傳雜志 , 2010,18 (8) : 75.
[8] Lin L,Chen DN,Guo J,et al. Development of a capillary zone electrophoresis method for rapid determination of human globin chains in a and β-thalassemia subjects[J].Blood Cells Mol Dis , 2015 ,55 (1) :62-67.
[9] Prajantasen T,Fucharoen S,Fucharoen G. High resolution melting analytical platform for rapid prenatal and postnatal diagnosis of β-thalassemia common among Southeast Asian population[J]. Clin Chim Acta,2015 ,441(441) :56-62.
[10] Prajantasen T,Fucharoen S,Fucharoen G,et al. Prenatal and post-natal screening of p-thalassemia and hemoglobin E genes in Thailand using denaturing high performance liquid chromatography [J]. Mol Biol Rep, 2013 , 40 ( 4) :3173-3179.
[11] Ho SS,Chong SS,Koay ES,et al. Microsatellite markers within _SEA breakpoints for prenatal diagnosis of HbBarts hydrops fetalis[J]. Clin Chem , 2007 , 53 ( 2) :173-1 7 9.
[12] Kho SL, Chua KH, George E, et al. A novel gap~PCR with high resolution melting analysis for the detection of a-thalassaemia Southeast Asian and Filipino β-thalassaemia deletion[J]. Sci Rep,2015 ,5 (2) :13 7-139,