老年人載脂蛋白E基因多態(tài)性、骨密度和骨量丟失

【摘要】  探討老年人載脂蛋白E（ApoE）基因多態(tài)性與髖骨密度（BMD）、骨丟失的關(guān)系。方法:隨機(jī)選取沈陽市60歲以上漢族健康老年人100名，用聚合酶鏈反應(yīng)限制性片段長度多態(tài)性（PCRRELP）方法檢測ApoE基因型，用DPX-L雙能X線吸收儀（Lunar,USA）分別在2000年和2005年兩次測量研究對象髖部骨密度。結(jié)果：該人群ApoE基因型頻率分布為 E2/3:17%, E3/3:66%,E3/4:15%, E4/4:1%，沒有E2/2和E4/4型。等位基因頻率分部為ε2：8%，ε3：84%，ε4：8%。無論男女?dāng)y帶ApoE4基因組和不攜帶ApoE4基因組間年齡、身高和體重均無差異。在2000年，攜帶ApoE4基因組和不攜帶ApoE4基因組兩組股骨頸、大轉(zhuǎn)子和 Ward區(qū)的骨密度經(jīng)身高、體重和年齡校正后，男女均沒有顯著性差異；相同分析各部位年骨丟失率也沒有顯著性差異。結(jié)論：該人群ApoE基因型與髖部骨密度無明顯相關(guān)性。

【關(guān)鍵詞】  載脂蛋白E；基因多態(tài)性；骨密度；骨丟失

　　Apolipoprotein E Ｅene Ｐolymorphism, BMD, and Ｂone Ｌoss in Ｏlder Ａdults

　　ZHOU Bo, WANG Xiaohong, WANG Songtao, GUO Lianying1,XU Chao, ZHANG Zhou, KAN  Zhiying

　　(1.The Department of Nutrition and Food Hygiene, Shenyang Medical College, Shenyang　110034, China;2.Northeastern University)

　　Abstractob[x]jective:To study the association between the ApoE gene polymorphism and bone mineral density (BMD), bone loss in older adults.Methods:One hundred healthy Han volunteers over 60 years old in Shenyang were selected.ApoE gene was measured by polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphism (PCRRELP).BMD at hip was measured using dual-energy X-ray (DPXL) absorption apparatus (Lunar,USA) in 2000 and 2005, respectively.Results：The ApoE gene phenotype in the population was E2/3: 16%, E3/3: 66%, E4/3:15%, E4/4:1%, while E2/2 and E4/2 was not found. The ApoE all lelomorph frequencies were 8% forε2，84% forε3，8% forε4. There were no difference in age, height and weight with the presence ApoE4 and absence ApoE4 in women and men. In 2000， after adjustment for height, weight, and age, there was no significant difference of the BMD in the femoral neck, trverosity and Ward areas between presence Apo E 4 and absence ApoE4 women and men. Annualized bone loss rate at hip did not differ by ApoE genotype for women and men. Conclusion:In our data, there is no significant association between Apo E genotype and BMD, bone loss of hip.

　　Key wordsApolipoprotein E gene; polymorphism; bone mineral density; bone loss

    骨質(zhì)疏松癥是與多種基因相關(guān)的疾病，其侯選基因的研究對于評估骨質(zhì)疏松性骨折的危險性、基因診斷和治療具有重要作用。近年來，國內(nèi)外學(xué)者越來越重視載脂蛋白E（ApoE）基因多態(tài)性與骨質(zhì)疏松的關(guān)系。有研究表明ApoE4型基因攜帶者骨量丟失速度快，易導(dǎo)致原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥及其骨折[1-3]。而另一些研究沒有觀察到ApoE基因多態(tài)性與骨密度及骨丟失有關(guān)[4-7]。本文探討了沈陽市老年人的ApoE基因多態(tài)性與髖部骨密度及骨量丟失的關(guān)系。

　　１  對象與方法

　　1.1  對象

　　2000年3月在沈陽市某社區(qū)內(nèi)隨機(jī)選出無血緣關(guān)系60歲以上的漢族健康老年人作為研究對象，排除患有糖尿病、甲狀腺疾病、腎臟疾病等影響骨代謝的疾病,并未服用維生素D和鈣補(bǔ)充劑，嚴(yán)重高脂血癥者也被排除。于2005年3月對上述研究對象進(jìn)行跟蹤研究，將資料完整者納入本文，共100名，其中男 46名，年齡（66.8±4.7）歲，女54名，年齡（64.6±3.8）歲。

　　1.2  方法

　　1.2.1  ApoE基因型測定

　　取靜脈血5ml經(jīng)EDTA抗凝，DNA提取試劑盒（QIAamp DNA Mini Kit ）提取DNA。PCR引物按參考文獻(xiàn)設(shè)計[8]。上下游引物序列分別為：5’TCCAAGGAGCTGCAGGCGGCGCA3’；5’ACAGAATTCGCCCCGGCCTGGTACACTGCCA3’。PCR反應(yīng)體系為50μl，包括基因組DNA3μl，10×擴(kuò)增緩沖液；dNTPs 各200 μmol/L；引物各25pmol。二甲基亞楓5μl，MgCl22.5mmol/L, Taq DNA 聚合酶2 U （Promega ）。置熱循環(huán)儀（Biometra,T3）中按下列程序循環(huán)30次，即95℃變性30s ,60℃退火30s ,72℃延伸1min 30s，后72℃再延伸10min。限制性酶切反應(yīng)在40μl體系中進(jìn)行，包括PCR反應(yīng)產(chǎn)物10μl，Cfo I限制性內(nèi)切酶20U（Promega），37℃，4 h。采用非變性聚丙烯酰胺電泳（濃度為12%，交聯(lián)度29：1），在常溫，離子強(qiáng)度為1×TBE條件下，70V恒壓電泳1.5h，分離Cfo I產(chǎn)物。0.5ml/L 濃度的EB中染色40min，在紫外燈下觀察、照像，分型。基因分析在已知標(biāo)準(zhǔn)物的對照下反復(fù)進(jìn)行多次，以排除錯誤出現(xiàn)。

　　1.2.2  髖部骨密度測定

　　用DPXL雙能X線吸收儀（Lunar,USA）在2000年3月和2005年3月分別兩次測定研究對象左測股骨頸、Ward三角和大轉(zhuǎn)子區(qū)的骨密度（g/cm2）。體模反復(fù)測定的變異系數(shù)為0.45%。

　　1.3  統(tǒng)計學(xué)分析

　　用Data Desk 6.1 軟件(Data Desc[x]ription Inc, Ithaca,NY)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理?；蝾l率采用基因計數(shù)法計算，基因頻率比較采用似然比χ2檢驗。每位研究對象年骨丟失率=（第2次骨密度值－第1次骨密度值）/第1次骨密度值／5×。為校正部分偏態(tài)分布數(shù)據(jù)，將數(shù)據(jù)（除年齡外）均變成自然對數(shù)后再進(jìn)行分析。各組內(nèi)的骨密度比較采用配對t檢驗?；蛐透鹘M間骨密度均值和年骨丟失率的比較用協(xié)方差分析，因為已知身高、體重和年齡是影響骨密度的因素，在分析時均以這些因素校正。

　　2  結(jié)果

　　2.1  ApoE基因型及等位基因頻率分布

　　該人群ApoE基因型分布為E2/3：17 %,E3/3：66%,E4/3：15%，E4/4：1%，沒有E2/2和E4/2型。等位基因頻率分別為ε2：8%, ε3：84%,ε4：8%。男女間等位基因頻率經(jīng)χ2檢驗差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=1.81,P>0.05）。

　　2.2  ApoE基因型對髖部骨密度的影響

　　攜帶ApoE4基因組(E4/3和E4/4)和不攜帶ApoE4基因組(E3/2 和E3/3)人群年齡、體重、身高和人體重指數(shù)（BMI）沒有顯著性差異。比較男性、女性攜帶ApoE4基因組和不攜帶ApoE4基因組間股骨頸、大轉(zhuǎn)子和Ward 區(qū)的第1次骨密度，經(jīng)年齡、身高和體重校正后，差異沒有顯著性。

　　2.3  ApoE基因型對骨丟失的影響

　　男女各組髖部骨密度第二次均明顯低于次。經(jīng)年齡、身高和體重校正，無論男女?dāng)y帶ApoE4基因組和不攜帶ApoE4基因組間股骨頸、大轉(zhuǎn)子和Ward 區(qū)的年骨丟失率差異均無顯著性統(tǒng)計學(xué)意義。表１Apo E基因型與髖部骨密度、骨丟失情況（略）注：1)與本組次比較，P＜0.01

　　3  討論

    本研究所分析人群的ApoE基因頻率與國內(nèi)研究報道的結(jié)果相似[7，9]，具有群體代表性。研究表明ApoE4基因型與一些疾病有關(guān)，本研究對象已排除可能與Apo E4基因型有關(guān)的疾病，如患有糖尿病、甲狀腺疾病、腎臟疾病等影響骨代謝的疾病,患有嚴(yán)重心血管疾病和高脂血癥者也被排除。

    一些研究認(rèn)為AopE基因型通過影響血漿維生素K和骨鈣素水平調(diào)節(jié)骨代謝，ApoE2型和ApoE3型者血漿維生素K水平高于ApoE4型者，因此骨鈣素羧化程度較高，有利于骨形成[10]。Masataka等[10]報道ApoE4等位基因與絕經(jīng)后日本婦女低骨密度密切相關(guān)，攜帶ApoE4等位基因者骨密度低。Villarreal等報道[1]攜帶ApoE型者骨丟失速率快，陶軍和胡建華[2，3]均報道中國絕經(jīng)后婦女原發(fā)性骨質(zhì)疏松患癥者ApoE4型等位基因頻率明顯高于正常對照者。但也有報道沒有觀察到ApoE基因型與骨密度的關(guān)系。Schoofs MW 等[4]對5 857名白人進(jìn)行2到7年的跟蹤沒有觀察到ApoE4 基因型對髖部骨密度和骨丟失的影響。Wong SY 等[7] 調(diào)查了香港人也沒有發(fā)現(xiàn)ApoE基因型與髖部骨密度有關(guān)。本文結(jié)果顯示該人群ApoE基因型與髖部骨密度、骨丟失無明顯相關(guān)性。由于ApoE基因型分布具有種族和地區(qū)差異，中國人Apo E4型攜帶者少，在本文中，研究對象人數(shù)100名，ApoE4型攜帶者僅16名可能影響結(jié)果。因此，關(guān)于ApoE基因多態(tài)性對骨密度和骨丟失的影響還需大樣本長期的研究。

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作者：周波,王曉紅,王松濤,郭連營,徐超,張卓，闞志英

作者單位：沈陽醫(yī)學(xué)院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)教研室，遼寧沈陽110034