高效液相色譜法測定仔花感冒膠囊中對乙酰氨基酚的含量

【摘要】  目的 建立仔花感冒膠囊中對乙酰氨基酚含量測定方法。方法 采用高效液相色譜法,以Kromasil-C18柱為固定相,甲醇-水(35∶65)為流動相,檢測波長為249 nm。結(jié)果 對乙酰氨基酚在0.165～0.99 μg(r＝0.999 9)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,平均加樣回收率為98.41%,RSD＝0.64%(n＝6)。結(jié)論 含量測定方法準確可靠,重復性好,可用于控制仔花感冒膠囊的質(zhì)量。
【關(guān)鍵詞】  仔花感冒膠囊；對乙酰氨基酚；高效液相色譜法
    Abstract：ob[x]jective To establish a method for the determination of Paracetamol in Zihua Ganmao Capsule. Method Samples were separated on a Kromasil-C18 column with the mobile phase of methanol- water (35∶65), and the detection wavelength was set at 249 nm. Result The calibration curves were linear in the range of 0.165～0.99 μg (r＝0.999 9) for Paracetamol. The average recovery was 98.41% and RSD＝ 0.64% (n＝6). Conclusion The method is accurate and repeatable, and can be used for the quality control of Zihua Ganmao Capsule.
    Key words：Zihua Ganmao Capsule；Paracetamol；HPLC
 
    仔花感冒膠囊由狗仔花、柴胡、藁本、防風、黃芩以及馬來酸氯苯那敏、對乙酰氨基酚等制成,具有清熱解毒、祛風止痛的功效,用于風熱感冒所見發(fā)燒頭痛、肢體不適。對乙酰氨基酚為其中的主要西藥成分之一,原質(zhì)量標準中用紫外分光光度法[1]測定對乙酰氨基酚的含量,重現(xiàn)性差、陰性干擾嚴重、誤差較大。為了更好地控制該藥的質(zhì)量,筆者采用高效液相色譜法測定對乙酰氨基酚的含量,方法簡便、結(jié)果準確、重復性好,可以較好地控制該產(chǎn)品的質(zhì)量。
　　1  儀器與試藥
    高效液相色譜儀：日本島津LC-10AD泵,SPD-10AV紫外檢測器,C-R7Ae數(shù)據(jù)處理機；超聲波清洗器[必能信超聲(上海)有限公司]。對乙酰氨基酚(中國藥品生物制品檢定所提供,批號10018-200408,供含量測定用)；仔花感冒膠囊(廣西玉林制藥有限責任公司提供,批號635002、635003、635004、735001、735002)。甲醇為色譜純,其他為分析純、水為去離子水。
　　2  方法與結(jié)果
　　2.1  色譜條件
    色譜柱：Kromasil-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流動相：甲醇-水(35∶65),流速：0.5 mL/min,柱溫：30 ℃,檢測波長：249 nm,進樣量10 μL。
　　2.2  對照品溶液的制備
    精密稱取在105 ℃干燥至恒重的對乙酰氨基酚適量,加甲醇制成每1 mL含50 μg的溶液,即得。
　　2.3  供試品溶液的制備
    取本品20粒的內(nèi)容物,精密稱定,研細,混勻,取約0.3 g,精密稱定。加甲醇35 mL,超聲處理(功率500 w,頻率50 kHz) 20 min,放冷,濾過,濾液置50 mL量瓶中,用少量甲醇分次洗滌容器和殘渣,洗液濾入同一量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻。精密量取1 mL置50 mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得供試品溶液。
2.4  線性關(guān)系考察
    精密稱取在105 ℃干燥至恒重的對乙酰氨基酚適量,加甲醇制成每1 mL含0.165 mg的溶液作為對照品溶液。精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5、6 mL,分別置10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,各精密吸取10 μL,分別注入液相色譜儀,依本法測定。以測得峰面積為縱坐標,對照品進樣量(μg)為橫坐標,繪制標準曲線,求得線性回歸方程：Y＝3 450 864X－9 698,r＝0.999 9(n＝6),表明對乙酰氨基酚進樣量在0.165～0.99 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
　　2.5  精密度試驗
    取同一份供試品溶液,依本法,按上述色譜條件測定,精密吸取10 μL,注入液相色譜儀,重復進樣6次,對乙酰氨基酚峰面積的RSD＝0.55%,結(jié)果表明儀器精密度良好。
　
　　2.6  穩(wěn)定性試驗
    吸取供試品溶液10 μL,于0、1、4、8、12、24 h,分別注入液相色譜儀,按上述色譜條件測定,結(jié)果對乙酰氨基酚峰面積RSD＝1.6%,說明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。
　　2.7  重復性試驗
    取同一批號(批號635003)的仔花感冒膠囊樣品5份,按供試品溶液制備項下操作,制備5份供試品溶液,按上述色譜條件測定,分別吸取10 μL注入液相色譜儀,測得對乙酰氨基酚的平均含量為0.306 8 g/g(n＝5,RSD＝1.50%)。
　　2.8  加樣回收率試驗
   
　　精密稱取已知含量的仔花感冒膠囊(對乙酰氨基酚含量為0.321 5 g/g)6份,分別準確加入對乙酰氨基酚對照品溶液(98.5 mg/mL)各1 mL,按供試品溶液制備項下操作,制備6份供試品溶液,按上述色譜條件測定,分別吸取10 μL注入液相色譜儀。結(jié)果見表1。表1  加樣回收率試驗結(jié)果（略） 
　　2.9  樣品測定
　　精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL,注入液相色譜儀,測定,記錄峰面積,根據(jù)對照品峰面積,計算出樣品溶液中對乙酰氨基酚的含量(見表2)。表2  樣品測定結(jié)果(略)
　　2.10  專屬性考察
　　對乙酰氨基酚對照品和仔花感冒膠囊在相同保留時間處有吸收峰,而陰性樣品在此處無吸收峰。色譜圖見圖1。
　　3  討論
    由于仔花感冒膠囊樣品中對乙酰氨基酚含量較大,為了盡量減少誤差,提高方法的準確性,通過紫外掃描,對乙酰氨基酚在249 nm有處大吸收,故選擇249 nm為檢測波長。
    根據(jù)文獻報道,曾用過流動相、檢測波長：①甲醇-水(15∶85),冰醋酸調(diào)pH至4.5,波長243 nm[2]；②以甲醇-0.025 mol KH2PO4(15∶85)用磷酸調(diào)節(jié)至pH 3.0,檢測波長為295 nm[3],結(jié)果以本試驗所用的流動相較佳,對乙酰氨基酚保留時間約為7.6 min,整個分析時間10 min。
   
　　在提取條件的選定過程中,我們曾采用過索氏提取法、熱回流法、超聲提取法,結(jié)果三者之間提取出的對乙酰氨基酚含量沒有顯著差異,但由于索氏提取法和熱回流法費時間較長,不利于生產(chǎn)過程的控制,超聲20 min提取所測定的對乙酰氨基酚含量高。因此,選擇了比較簡便、且效率較高的超聲提取法。
【參考文獻】
  　　[1] 廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳.廣西藥品標準[S].1988.217.

　　[2] 容穎慈,李瑞明,盧秉忠,等.HPLC測定感冒靈顆粒中對乙酰氨基酚含量[J].廣東藥學,2003,13(2)：23－24.

　　[3] 郭宇鵬.HPLC測定精制銀翹解毒片中綠原酸和乙酰氨基酚含量[J].中成藥,2006,28(7)：976－977.