COX-2和MMP-9在絕經(jīng)前后子宮內(nèi)膜息肉中的表達(dá)及其意義

作者：薛翔1,郭維2,公丕軍1　　作者單位：1.西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院;　2. 陜西省人民醫(yī)院
　　【摘要】 目的　研究絕經(jīng)前、后子宮內(nèi)膜息肉(EMP)中環(huán)氧合酶-2(COX-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達(dá)及二者的相關(guān)性，為研究EMP形成機(jī)理提供線索。方法　選取存檔石蠟標(biāo)本共150例，其中絕經(jīng)前、后EMP各45例，絕經(jīng)前正常增生期子宮內(nèi)膜和絕經(jīng)后正常萎縮型子宮內(nèi)膜各30例，用免疫組化SP法檢測(cè)各組COX-2、MMP-9的表達(dá)情況，并分析兩指標(biāo)在EMP組織中的表達(dá)及相關(guān)性。結(jié)果　絕經(jīng)前組COX-2、MMP-9在EMP腺體和間質(zhì)的表達(dá)均顯著高于二者在正常增生期子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(P<0.05)。絕經(jīng)后組COX-2、MMP-9在EMP間質(zhì)和腺體中的表達(dá)均高于二者在絕經(jīng)后正常萎縮型子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(P<0.05)。COX-2在絕經(jīng)前、后EMP腺體中的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，COX-2在絕經(jīng)前EMP間質(zhì)中的表達(dá)高于其在絕經(jīng)后EMP間質(zhì)中的表達(dá)(P<0.05)，MMP-9在絕經(jīng)前EMP的腺體和間質(zhì)中的表達(dá)高于其在絕經(jīng)后的表達(dá)(P<0.05)。COX-2與MMP-9在EMP腺體和間質(zhì)表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.01)。結(jié)論　COX-2和MMP-9在EMP中高表達(dá)，且呈正相關(guān)。
　　【關(guān)鍵詞】 子宮內(nèi)膜息肉;環(huán)氧合酶-2;基質(zhì)金屬蛋白酶-9

　　隨著宮腔鏡檢查的廣泛應(yīng)用，子宮內(nèi)膜息肉(Endometrial Polyps，EMP)的檢出率明顯升高，大部分EMP是良性的，而且有文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)有0.5%～1.5%的息肉可發(fā)生惡變，并且絕經(jīng)后婦女隨著年齡的增加，惡變率逐漸上升[1-2]，所以EMP被認(rèn)為是子宮內(nèi)膜癌的一個(gè)重要的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。EMP的發(fā)病機(jī)制和病因不明確，本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組化方法(SP法)檢測(cè)絕經(jīng)前、后EMP中COX-2、MMP-9的表達(dá)情況及二者在相應(yīng)生理階段正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)情況，為進(jìn)一步研究EMP形成機(jī)制提供一些線索。
　　1　資料與方法
　　1.1　研究對(duì)象

　　選取150例西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院病理科存檔蠟塊，2008年2月至2011年8月在我院行宮腔鏡下息肉切除術(shù)的未絕經(jīng)及絕經(jīng)后患者的息肉標(biāo)本各45例，經(jīng)2名病理醫(yī)生診斷為子宮內(nèi)膜息肉作為實(shí)驗(yàn)組;隨機(jī)抽取同期門診行診斷性刮宮術(shù)或?qū)m腔鏡下檢查及活檢術(shù)的內(nèi)膜標(biāo)本，經(jīng)病理診斷為絕經(jīng)前正常增殖期子宮內(nèi)膜、絕經(jīng)后正常萎縮型子宮內(nèi)膜標(biāo)本各30例，作為對(duì)照組。所有患者手術(shù)前3個(gè)月內(nèi)未接受過(guò)任何激素治療，未曾行卵巢切除術(shù)，未接受非甾體抗炎藥治療，無(wú)嚴(yán)重心肺疾病、肝腎功能不全等合并癥及伴發(fā)其他臟器惡性腫瘤。
　　兩實(shí)驗(yàn)組與相應(yīng)對(duì)照組之間(未絕經(jīng)EMP 患者和正常增生期子宮內(nèi)膜提供者、絕經(jīng)后EMP患者和絕經(jīng)后正常萎縮型子宮內(nèi)膜提供者)年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。絕經(jīng)前、后EMP患者息肉平均直徑無(wú)顯著性差異。
　　1.2　方法

　　兔抗人COX-2單克隆抗體和兔抗人MMP-9單克隆抗體、SP試劑盒均購(gòu)自北京中杉生物科技有限公司。COX-2工作濃度為1∶150;MMP-9工作濃度為用1∶100。將石蠟塊進(jìn)行4μm厚連續(xù)切片，二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，高溫煮沸抗原修復(fù)(切片放入pH值6.0枸櫞酸緩沖液中)，按說(shuō)明書采用免疫組化SP法染色，DAB顯色，常規(guī)脫水、透明及封片。以PBS代替一抗作空白對(duì)照。
　　1.3　結(jié)果判定

　　COX-2主要以胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽(yáng)性細(xì)胞，MMP-9主要以胞漿和胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽(yáng)性細(xì)胞。每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野(×200)，取5個(gè)視野所見的陽(yáng)性細(xì)胞百分比的平均值記分，1分：≤10%的細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng);2分：10%～24%的細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng);3分：25%～49%的細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng);4分：≥50%的細(xì)胞呈陽(yáng)性反應(yīng);染色強(qiáng)度記分為;0分：陰性染色;1分：弱陽(yáng)性染色;2分：中度陽(yáng)性染色;3分：強(qiáng)陽(yáng)性染色。每張切片的評(píng)分以這兩項(xiàng)者之積表示，0分為(-),1～4分為(+),5～8分為(++),9～12分為(+++)。
　　1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　用SPSS 11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用Mann-Whitney U 秩和檢驗(yàn)對(duì)等級(jí)資料進(jìn)行比較分析，采用Spearman系數(shù)檢驗(yàn)對(duì)資料進(jìn)行相關(guān)性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2　 結(jié)果

　　2.1　COX-2、MMP-9在絕經(jīng)前內(nèi)膜息肉組和正常增生期內(nèi)膜組的表達(dá)
　　COX-2、MMP-9在絕經(jīng)前EMP腺體和間質(zhì)的表達(dá)均顯著高于二者在絕經(jīng)前正常增生期子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(P<0.01、P<0.05)，見表1。表1　COX-2、MMP-9在絕經(jīng)前子宮內(nèi)膜息肉和正常增生期子宮內(nèi)膜中的表達(dá)

　　2.2　COX-2、MMP-9在絕經(jīng)后內(nèi)膜息肉組及正常萎縮期內(nèi)膜組的表達(dá)
　　COX-2、MMP-9在絕經(jīng)后EMP間質(zhì)和腺體中的表達(dá)均高于二者在絕經(jīng)后正常萎縮型子宮內(nèi)膜中的表達(dá)(P<0.01、P<0.05)，見表2。表2　COX-2、MMP-9在絕經(jīng)后子宮內(nèi)膜息肉和正常萎縮型子宮內(nèi)膜中的表達(dá)

　　2.3　COX-2、MMP-9在絕經(jīng)前EMP和絕經(jīng)后EMP中表達(dá)的比較

　　在EMP的腺體中，COX-2在絕經(jīng)前后的表達(dá)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，COX-2在EMP的間質(zhì)中，絕經(jīng)前高于絕經(jīng)后的表達(dá)(P<0.05)，MMP-9在絕經(jīng)前EMP的腺體和間質(zhì)中的表達(dá)均高于其在絕經(jīng)后的表達(dá)(P<0.01、P<0.05)，見表3。表3　COX-2、MMP-9在絕經(jīng)前、后子宮內(nèi)膜息肉中的表達(dá)

　　2.4　COX-2、MMP-9在EMP中表達(dá)的相關(guān)性
　　COX-2與MMP-9在EMP腺體和間質(zhì)表達(dá)的相關(guān)系數(shù)r=0.435，P<0.01)，二者呈顯著正相關(guān)，見表4。
　　3　討論

　　正常月經(jīng)周期中子宮內(nèi)膜的改變是在雌、孕激素的周期性作用下內(nèi)膜細(xì)胞不斷發(fā)生增生及死亡的周期性更替過(guò)程。有研究表明子宮內(nèi)膜周期性脫落就是子宮內(nèi)膜細(xì)胞凋亡的結(jié)果。目前的觀點(diǎn)認(rèn)為EMP可能是一種無(wú)法與月經(jīng)周期進(jìn)行程序性增殖、轉(zhuǎn)化和凋亡的失控性腫瘤，而不是一種看似簡(jiǎn)單的長(zhǎng)期炎性刺激的增生物。Taylor等[3]對(duì)增生期和分泌期EMP與其相同周期的正常內(nèi)膜上ER、PR、Ki-67及Bcl-2的表達(dá)情況進(jìn)行研究，認(rèn)為Bcl-2局部高表達(dá)引起的內(nèi)膜凋亡抑制是EMP形成的一個(gè)重要機(jī)制。Mc Gurgan等[4] 研究認(rèn)為絕經(jīng)前后息肉ER和PR表達(dá)不同與其所處的激素環(huán)境不同有關(guān)，但均保持正常內(nèi)膜的細(xì)胞增殖調(diào)控(Ki-67表達(dá))，而喪失了正常的激素受體對(duì)凋亡的調(diào)控機(jī)制(Bcl-2表達(dá))，推測(cè)絕經(jīng)前后的息肉可能是各種機(jī)制引起的凋亡減少形成的。COX-2作為前列腺素合成過(guò)程中的關(guān)鍵限速酶，MMP-9又是細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrixc，ECM)降解過(guò)程中為重要的一組蛋白水解酶，目前已證實(shí)，高表達(dá)的COX-2、MMP-9與腫瘤血管生成、細(xì)胞增殖、凋亡抑制、細(xì)胞免疫抑制等都有十分密切的關(guān)系，所以研究EMP中COX-2、MMP-9的表達(dá)也許可以為研究EMP的發(fā)生機(jī)制提供一些線索。
　　本次研究結(jié)果顯示無(wú)論是在絕經(jīng)前還是絕經(jīng)后EMP腺體和間質(zhì)中COX-2、MMP-9的表達(dá)量均高于相應(yīng)同一生理周期正常子宮內(nèi)膜腺體及間質(zhì)中COX-2、MMP-9的表達(dá)量，這與Evrim等的實(shí)驗(yàn)結(jié)果部分相類似。絕經(jīng)前后EMP上COX-2和MMP-9的高表達(dá)提示二者在絕經(jīng)前后EMP的發(fā)生、發(fā)展中可能起到了一定的作用。
　　比較絕經(jīng)前、后EMP上COX-2和MMP-9的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，除COX-2在腺體的表達(dá)無(wú)差異外，COX-2在間質(zhì)的表達(dá)以及MMP-9在腺體和間質(zhì)的表達(dá)，絕經(jīng)前EMP的表達(dá)均高于絕經(jīng)后。這與體內(nèi)激素水平的變化保持著某種默契。而且已有報(bào)道，正常人子宮內(nèi)膜的表面上皮細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞COX-2的表達(dá)在月經(jīng)周期中明顯變化，在增生早期低，然后逐步增高，在整個(gè)分泌期維持高水平直至月經(jīng)期達(dá)高峰。而現(xiàn)在已有研究表明[5]，雌激素是COX-2表達(dá)的潛在刺激因素，孕激素在COX-2表達(dá)減少方面起了一定作用。因此可以推斷，激素水平對(duì)COX-2和MMP-9的表達(dá)起一定作用。
　　由此可推測(cè)，在EMP的形成原因中既有局部細(xì)胞的過(guò)度增殖，也有正常情況下應(yīng)有的維持細(xì)胞數(shù)量的凋亡機(jī)制受到抑制。這種局部組織的協(xié)調(diào)作用使得子宮內(nèi)膜局部細(xì)胞壽命延長(zhǎng)，導(dǎo)致細(xì)胞數(shù)目的不斷增加，在組織學(xué)上就表現(xiàn)為局部腺體和間質(zhì)的異常增生。這種細(xì)胞壽命的延長(zhǎng)使得遺傳物質(zhì)發(fā)生突變的機(jī)會(huì)增加，從而使EMP發(fā)生惡變的可能增加。
　　研究證實(shí)COX-2與MMP-9之間，在許多病理情況下，存在明顯的正相關(guān)性。Dicken等[6]通過(guò)免疫組化方法研究114例胃癌病理樣本發(fā)現(xiàn)，COX-2的高表達(dá)與MMP-2、MMP-9間存在著明顯的正相關(guān)性，且都與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤的分期有關(guān);Sun等[7]發(fā)現(xiàn)COX-2與MMP-9在胃癌中表達(dá)的亦有明顯的正相關(guān)性。
　　本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)COX-2和MMP-9在EMP的表達(dá)中呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為r=0.435，推測(cè)可能COX-2作為早期事件，影響MMP-9的表達(dá)，其與MMP-9協(xié)同作用，共同上調(diào)，促進(jìn)EMP的發(fā)生。COX-2在EMP的血管形成方面可能起一定的作用，而MMP-9能降解ECM和基底膜，ECM和基底膜的降解有助于血管內(nèi)皮細(xì)胞出芽，是形成新生血管的基礎(chǔ)。Fa等[8] 通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)COX-2抑制劑可以明顯抑制體外前列腺癌細(xì)胞中MMPs的產(chǎn)生及其活性。有學(xué)者[9]發(fā)現(xiàn)可以通過(guò)asprin抑制MMP-9的表達(dá)并進(jìn)而抑制EB病毒有關(guān)的腫瘤的侵襲，以上都提示COX-2與MMP-9存在某種關(guān)聯(lián)機(jī)制。
　　綜上所述，本次研究發(fā)現(xiàn)COX-2和MMP-9在EMP中高表達(dá)，且兩者之間表達(dá)顯著正相關(guān)，推測(cè)COX-2、MMP-9在EMP的發(fā)生、發(fā)展中可能起一定作用，絕經(jīng)前、后EMP中COX-2和MMP-9表達(dá)的差異可能與雌激素水平的變化有關(guān)。
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