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本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的三聚氰胺和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭三聚氰胺抗體
配制樣品稀釋液：

稱取89.5 g Na₂HPO₄·12H₂O ，蒸餾水定容至1000 mL。

濕的寵物食品萃取方法（稀釋100倍）

1．勻質(zhì)樣品到布丁狀；

2．稱取2 g樣品加入10 mL 60%甲醇水溶液，并劇烈振蕩；

3．超聲萃取1 min，漩渦混合1 min，然后靜止5 min，使樣品分層；

4．5000 r/min室溫離心5 min，用玻璃纖維濾紙過濾上清液，并將其收集于干凈試管中；

5．用樣品稀釋液將濾液20倍稀釋；

6．取50 μL進行實驗。

干的寵物食品萃取方法（稀釋200倍）

1．均質(zhì)干的寵物飼料樣品；

2．稱取1 g樣品加入10 mL 60%甲醇水溶液，并劇烈振蕩；

3．超聲萃取1 min，漩渦混合1 min，然后靜止5 min，使樣品分層；

4．5000 r/min室溫離心5 min，用玻璃纖維濾紙過濾上清液，并將萃取液收集于干凈試管中；

6．用樣品稀釋液將濾液20倍稀釋；

7．取50 μL進行實驗。

操作說明：

1．將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～26℃）下平衡30min以上，將需用的板條放入支架，按順序編號；

2．洗液配制：將50 mL濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水稀釋至1000 mL備用（或按需量稀釋）；

3．在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入50 μL標(biāo)準(zhǔn)品，樣品孔加入50 μL待測樣品，然后每孔加入50 μL抗體（加入標(biāo)品和樣品時無時間差的影響），輕拍混勻，37℃下孵育40 min；

4．倒出孔中的液體，用洗板機洗滌4～6遍；沒有洗板機的用戶可用300 μL洗液充入各孔中，靜置20 s，倒出孔中的液體，將微孔架倒置，在吸水紙上連續(xù)拍打3次以上，以保證完全除去孔中的液體，重復(fù)操作4～6遍；

5．加入酶標(biāo)記物100 μL，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃ 環(huán)境中反應(yīng)20 min，取出重復(fù)洗板步驟；

6．顯色：每孔加入底物緩沖液50 μL，再加底物液50 μL，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后，置37℃ 環(huán)境中反應(yīng)10 min；

7．測定：每孔加入終止液50 μL，輕輕振蕩混勻．設(shè)定酶標(biāo)儀于450 nm處，測定每孔OD 值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品濃度。

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