新鮮血比對方法在血液分析儀中的應(yīng)用

【摘要】 　　目的：應(yīng)用正常人新鮮全血對多臺血液分析儀進(jìn)行比對，使血液分析儀各參數(shù)之間具有可比性。方法：選擇性能良好、規(guī)范化操作的血液分析儀作為參比儀，用該儀器定值的健康人新鮮血校準(zhǔn)比對3臺血液分析儀（比對儀）。結(jié)果： 3臺比對儀白細(xì)胞（WBC）比對前偏倚分別為（7.32、4.49、8.70）%，血小板（PLT）比對前偏倚分別為（4.75、17.1、11.8）%； WBC比對后偏倚分別為（0.3、2.5、1.7）%， PLT比對后偏倚分別為（1.7、0.7、1.1）%；WBC、PLT差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），RBC、HGB、HCT、MCV差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）,但相關(guān)性存在差異，通過比對試驗校準(zhǔn)儀器后結(jié)果一致性良好。結(jié)論： 該方法能方便、經(jīng)濟(jì)地對血液分析進(jìn)行有效的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 血液分析儀；新鮮全血；比對法

　?。跘BSTRACT］ ob[x]jective: To investigate application of the comparison of fresh whole blood in hematology analyzer. Methods: The hematology analyzer with good performance, and standardized operation was selected as a reference instrument, and the results tested by 3 hematology analyzers with the fresh blood of healthy individuals was calibrated ba[x]sed on the former. Results: For the 3 hematology analyzers, the bias before the comparison were: WBC(-7.32, -4.49, -8.70)%; RBC(-1.34, -3.58, -1.34)% ; HGB (-0.06,1.81,1.69)%; HCT(3.05,1.52, -0.8)%; MCV(0.03,0.67,4.7)%; PLT(-4.75, -17.1, -11.8)%, respectively; the bias after comparison were: WBC(-0.3,2.5, -1.7)%; RBC(0.9, -1.6, -1.3)%; HGB(1.4 , 0, -0.03)%; HCT(1.7, -0.2,0.3)%; MCV (0.9, -0.6, -0.3)%; PLT(-1.7, -0.7, -1.1)%. There was significant difference in WBC and PLT(P <0.05), and no significant difference in RBC, HGB, HCT, MCV((P> 0.05). But there was differenct relevance. The results by calibrating the equipment were consistent with the comparison test. Conclusions: The method is effective and economical in quality control for the blood analysis.

　?。跭EY WORDS］ Hematology analyzer; Fresh whole blood; Comparison

　　血液分析儀是臨床實(shí)驗室進(jìn)行血細(xì)胞分析的常用儀器，其檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性直接影響患者疾病的診斷、治療和觀察，只有將血液分析儀檢測結(jié)果直接或簡潔溯源至參考方法［12］，并進(jìn)行良好的室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評價，才能更有效地保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性。目前大、中型醫(yī)院使用進(jìn)口血液分析儀普遍，同一實(shí)驗室或?qū)嶒炇乙粋€部門擁有多臺血液分析儀也較常見。由于進(jìn)口血液分析儀配套的校準(zhǔn)物和質(zhì)控物進(jìn)口周期長、價格昂貴、效期短［3］，此外一些血液分析儀無適合的校準(zhǔn)物和質(zhì)控物，因此，實(shí)驗室內(nèi)每臺血液分析儀都使用配套校準(zhǔn)物和質(zhì)控物有實(shí)際困難。本研究采用比對方法，以性能良好、規(guī)范操作的血液分析儀為參比儀，用該儀器定值的健康人新鮮血校準(zhǔn)比對血液分析儀（比對儀），使比對儀全血細(xì)胞計數(shù)結(jié)果簡潔溯源至參考方法［4］；健康人新鮮血標(biāo)本作為比對物，對比對儀進(jìn)行校準(zhǔn)比對，保證比對儀檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 儀器與試劑

　　德國西門子醫(yī)療診斷設(shè)備有限公司生產(chǎn)的全自動血液分析儀ADVIA 2120 1臺，中國深圳邁瑞公司生產(chǎn)的全自動血液分析儀BC5500 3臺（分別標(biāo)注為A、B、C），共4臺全自動血液分析儀及其配套試劑。

　　1.1.2 校準(zhǔn)物

　　ADVIA 2120全自動血液分析儀的配套校準(zhǔn)物（批號：SP91013）由德國西門子醫(yī)療診斷設(shè)備有限公司提供。

　　1.1.3　質(zhì)控物

　　全血質(zhì)控物（批號：TP91021、TP92021、TP93021）由德國西門子醫(yī)療診斷設(shè)備有限公司提供。

　　1.1.4 抗凝新鮮血

　　健康人新鮮血由健康志愿者提供，用真空采血器采集正常人新鮮全血10mL,用乙二胺四乙酸二鉀（EDTAK2) 抗凝劑混勻（抗凝濃度1.8～2.2mg/mL),同時將血液分成3份，第1份用于定值測定，第2份用于比對測定，第3份用于比對后驗證，2h內(nèi)完成4臺血液分析儀的比對試驗。

　　1.2 方法

　　1.2.1 參比儀質(zhì)量保證

　　以性能良好、規(guī)范化操作的血液分析儀作為參比儀系統(tǒng)。選擇ADVIA 2120作為3臺BC5500比對的參比儀，該儀器使用配套試劑及質(zhì)控品；該儀器由西門子公司技術(shù)人員于2009年3月9日用配套校準(zhǔn)品校準(zhǔn)；每個工作日用配套低、中、高3個水平的全血質(zhì)控物進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，結(jié)果良好。在ADVIA2120儀器上連續(xù)測定第1份新鮮全血11次，計算第2～11次各參數(shù)檢測結(jié)果，作為新鮮全血的定值。

　　1.2.2 比對儀器的分析前準(zhǔn)備

　　將3臺BC5500血液分析儀管道清洗，去除管道中的殘留血液、吸附的蛋白和纖維等，然后測定試劑的空白，本底必須符合要求。另取1份正常人新鮮血在各臺儀器上進(jìn)行精密度測試，計算血紅蛋白（HGB）、白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）、紅細(xì)胞壓積（HCT）、紅細(xì)胞平均體積（MCV）和血小板（PLT）的變異系數(shù)（CV），確認(rèn)儀器的精密度在要求范圍內(nèi)方可進(jìn)行比對試驗。

　1.2.3 血液分析儀的比對儀

　　取第2份新鮮全血顛倒混勻，在BC5500三臺待比對儀器上分別連續(xù)測定11次，計算第2～11次各參數(shù)均值與定值之間的偏倚，采用以下標(biāo)準(zhǔn)判斷儀器是否需要比對：WBC≤3%、RBC≤1.5%、Hb≤1.5%、HCT≤1.5%、MCV≤1.5%、PLT≤3%，超出上述范圍，計算新的比對系數(shù)并重新設(shè)置輸入儀器內(nèi)。偏倚=（均值  定值）/定值×，新比對系數(shù)=舊比對系數(shù)×定值/檢測值。

　　1.2.4 校準(zhǔn)比對后結(jié)果的驗證

　　取第3份新鮮全血，在已比對儀器上重復(fù)測定11次，計算第2～11次均值與定值之間的偏倚。

　　1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

　　數(shù)據(jù)以（±s）表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

　　2 結(jié)果

　　各儀器重復(fù)性測定結(jié)果見表1。表1 各儀器重復(fù)性測定結(jié)果的變異系數(shù)（略）

　　新鮮全血定值的確定結(jié)果見表2。表2 新鮮全血各參數(shù)定值的測定結(jié)果(略)

　　比對前各臺儀器新鮮全血測定結(jié)果見表3。表3 校準(zhǔn)比對前各儀器新鮮全血測定結(jié)果與偏倚(略)

　　比對后各儀器驗證：比對后的結(jié)果偏倚遠(yuǎn)小于美國CLIA，88能力驗證分析質(zhì)量要求［5］(WBC、RBC、HGB、HCT、PLT、MCV可接受限為靶值±15%、±6%、±7%、±6%、±25%、±6%)，結(jié)果見表4。表4 校準(zhǔn)比對后各儀器新鮮全血測定結(jié)果與偏倚(略)

　　各臺血液分析儀比對前、后的系數(shù)結(jié)果見表5。表5 3臺血液分析儀比對前、后的系數(shù)（略）

　　BC5500A、BC5500C的，校準(zhǔn)前比對偏倚為-7.32%、-8.7%，校準(zhǔn)后降到2.5%、-1.7%；BC5500B、BC5500C的PLT，校準(zhǔn)前比對偏倚為-11.7%、-11.8%，校準(zhǔn)后降到-0.7%、-1.1%；差異均有統(tǒng)計學(xué)意義均（P<0.05）。

　　3 討論

　　血液分析儀操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，已經(jīng)成為各級醫(yī)院臨床檢驗專業(yè)的主要檢測手段。隨著醫(yī)院工作量的逐漸增大，很多醫(yī)院已擁有多臺不同型號的血液分析儀，但由于各廠家生產(chǎn)的血液分析儀采用的原理和試劑性質(zhì)不同，造成結(jié)果潛在差異［6］。因此，要保證血液分析儀檢測結(jié)果之間的一致性，除了要有完善的質(zhì)量控制體系，還必須建立合理的比對程序，即用可溯源的血液檢測系統(tǒng)定期對本實(shí)驗室用于常規(guī)檢測的血液分析儀進(jìn)行比對。由于儀器配套校準(zhǔn)物質(zhì)成本高、有效期短等多種原因，難以得到普遍推廣［7］。用“定值”的正常人新鮮全血進(jìn)行儀器比對為提供了一條可行的途徑。用ADVIA 2120全自動血液分析儀作為規(guī)范操作檢測系統(tǒng)對健康人新鮮全血進(jìn)行定值及儀器比對，ADVIA 2120全自動血液分析儀每年由西門子公司技術(shù)人員用配套校準(zhǔn)品校準(zhǔn)。并且規(guī)范的開展室內(nèi)質(zhì)評管理，同時參加室間質(zhì)評成績優(yōu)良，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，所以可作為室內(nèi)質(zhì)控參比儀器。在血液分析儀的比對過程中，3臺血液分析儀的部分檢測項目經(jīng)過1次比對，與定值的偏倚降低到允許范圍內(nèi)，但部分檢測項目需經(jīng)過2次比對后偏倚才降到規(guī)定允許范圍內(nèi)，如BC5500 A、BC5500 C的WBC，校準(zhǔn)前比對偏倚為-7.32％、-8.7％，校準(zhǔn)后比對偏倚降到2.5％、-1.7％;又如BC5500 B、BC5500 C的PLT，校準(zhǔn)前比對偏倚為-17.1％、-11.8％，校準(zhǔn)后比對偏倚降到-0.7％、-1.1％；差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），RBC、HGB、HCT、MCV校準(zhǔn)前、后差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P ＞0.05）,但相關(guān)性存在差異，通過比對試驗儀器校準(zhǔn)儀器后結(jié)果一致性良好。校準(zhǔn)比對前，一般先對儀器精密度進(jìn)行測試，各項參數(shù)的CV均要求在儀器規(guī)定的范圍內(nèi)（見表1）。同時新鮮全血標(biāo)本應(yīng)及時檢測，因為新鮮全血穩(wěn)定性差，一般要求在4h內(nèi)完成定值及儀器的比對［8］。

　　本方法取材方便、操作簡單、經(jīng)濟(jì)有效，對目前同一實(shí)驗室擁有多臺儀器血液分析儀進(jìn)行質(zhì)量控制，加強(qiáng)同一實(shí)驗室內(nèi)多臺血液分析儀間全血細(xì)胞計數(shù)準(zhǔn)確性和可比性有實(shí)際應(yīng)用價值。

【參考文獻(xiàn)】
　　1 International Council for Standardization in Haematolgy. Expert panel on cytometry and international society of laboratory hematology task force on platelet counting:Platelet ciunting by RBC/Platelet ratio method ［J］.Am J lin Pathol,2001，115:460464.

　　2 International Council for Standardization in Haematolgy.Prepared by expert panel on cytometry:Recmmendation for refernce method for packed cell volume［J］.Lab Hemaol,2001，7:148170.

　　3 彭明婷，申子瑜.對血細(xì)胞分析朔源體系的研究［J］.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2007，27：132133.

　　4 叢玉隆.血液體液檢驗與臨床釋疑［M］.北京： 人民軍醫(yī)出版社,2004.294298.

　　5 申子喻.醫(yī)院管理學(xué)：臨床實(shí)驗室管理分冊［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社,2008.143.

　　6 藤本敬二.血液分析儀的溯源的國際參考方法［J］.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2004，27（1）：5356.

　　7 彭明婷.建立血細(xì)胞分析溯源體系的有關(guān)問題［J］. 中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2006，29（4）：381.

　　8 葉應(yīng)嫵.全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］.第3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006.141.