Caveolin1、PCNA在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義

　　作者：邸輝,田春輝,王冀偉,李志紅,史彥芳　　作者單位：河北省保定市，河北大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科
　　膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見(jiàn)的腫瘤，目前對(duì)膠質(zhì)瘤的病因尚不完全清楚，依然不能從根本上將其治愈[1]。腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡及血管生成的信號(hào)通路異常有關(guān)。Caveolin1是定位于細(xì)胞質(zhì)膜微囊部位的結(jié)構(gòu)蛋白，它參與了各種信號(hào)分子和信號(hào)通路的調(diào)控。已證實(shí)在多種不同組織來(lái)源的腫瘤細(xì)胞中，Caveolin1的表達(dá)水平明顯下降乃至消失，發(fā)揮了抑癌基因樣作用。增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)是一種表明細(xì)胞增殖的可靠指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化技術(shù)，對(duì)膠質(zhì)瘤中Caveolin1及PCNA的表達(dá)進(jìn)行研究，探討它們之間的相互關(guān)系，分析其與膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展及生物學(xué)行為的意義。
　　1 資料與方法
　　1.1 一般資料
　　病例組：選取我科2005年1月至2008年8月手術(shù)切除的膠質(zhì)瘤標(biāo)本60例，其中男44例，女36例;年齡7～72歲，平均年齡46.5歲。參照Kernohan膠質(zhì)瘤分級(jí)法分為四級(jí)：Ⅰ級(jí)10例，Ⅱ級(jí)15例，Ⅲ級(jí)20例，Ⅳ級(jí)15例。其中將Ⅰ、Ⅱ級(jí)25例稱(chēng)為低級(jí)別組，將Ⅲ、Ⅳ級(jí)35例稱(chēng)為別組。對(duì)照組：另取腦外傷行內(nèi)減壓的正常腦組織8例作為對(duì)照，其中男4例，女4例;年齡16～67歲，平均年齡48.8歲。
　　1.2 方法

　　(1)標(biāo)本準(zhǔn)備：蠟塊連續(xù)切片6張，片厚4 μm。1張做HE染色確定診斷，4張免疫組織化學(xué)染色，1張備用。(2)免疫組織化學(xué)染色：采用Elivision二步免疫組化法。(3)實(shí)驗(yàn)對(duì)照：正常腦組織與腫瘤組織同樣處理作為正常組織對(duì)照;用已知Caveolin1表達(dá)陽(yáng)性的膀胱癌存檔蠟塊作為陽(yáng)性對(duì)照。每次用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。
　　1.3 結(jié)果觀察與判斷標(biāo)準(zhǔn)
　　以細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞漿表達(dá)棕黃色顆粒為Caveolin1表達(dá)陽(yáng)性。細(xì)胞核染成棕黃色為PCNA蛋白染色陽(yáng)性表現(xiàn)。每一張切片選取連續(xù)的10～20個(gè)高倍視野(×400)，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，分別計(jì)算它們的陽(yáng)性率。平均陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總計(jì)數(shù)細(xì)胞的10%以上者為陽(yáng)性。
　　1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　應(yīng)用 SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，用Spearman 等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)來(lái)分析Caveolin1、PCNA 在膠質(zhì)瘤中表達(dá)的相關(guān)性，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2 結(jié)果

　　2.1 PCNA在膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的表達(dá)

　　PCNA在正常腦組織中未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)，在低級(jí)別、別組陽(yáng)性表達(dá)分別為9例、33例，其陽(yáng)性表達(dá)率分別為36.00%、94.29%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=46.12，P<0.05)。
　　2.2 Caveolin1蛋白在膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的表達(dá)

　　Caveolin1在正常腦組織中未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)，在低級(jí)別、別組陽(yáng)性表達(dá)分別為16例、13例，其陽(yáng)性表達(dá)率分別為64.00%、37.14%。差異均統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=16.52，P<0.05)。
　　2.3 相關(guān)性分析
　　PCNA與Caveolin1的表達(dá)相關(guān)性，經(jīng)Spearman 等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)分析顯示兩者在膠質(zhì)細(xì)胞瘤中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(r=-0.604，P<0.05)。
　　3 討論

　　膠質(zhì)瘤在國(guó)內(nèi)發(fā)病率占顱內(nèi)腫瘤的首位，約占顱內(nèi)腫瘤的40%～50%[2，3]。目前臨床上采取以手術(shù)為主的綜合治療，但由于其浸潤(rùn)性生長(zhǎng)和惡性發(fā)展的特點(diǎn)，術(shù)后易復(fù)發(fā)，治療效果不理想。目前膠質(zhì)瘤發(fā)生的確切病因尚不完全清楚，所以，研究膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制并尋求早期診斷及防治措施一直是人們廣泛關(guān)注的焦點(diǎn)。
　　Caveolin1是一種細(xì)胞質(zhì)膜微囊表面標(biāo)記蛋白，它不僅在組織細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)、蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中發(fā)揮重要作用，而且在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中具有重要的作用。近年來(lái)許多研究發(fā)現(xiàn)，Caveolin1在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)下降。Wiechen等[4]用免疫組化法檢測(cè)卵巢癌病例，發(fā)現(xiàn)正常的卵巢上皮和良性病變上皮表達(dá)Caveolin1，而卵巢癌中表達(dá)減少。Hayashi等[5]對(duì)92例原發(fā)性乳腺癌樣本進(jìn)行研究，結(jié)果16%的病例檢測(cè)到了Caveolin1基因132代碼的突變(P132L)，提示Caveolin1的突變可能在乳腺癌的發(fā)生中起著重要作用。在Caveolin1基因敲除的小鼠中，其腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移均較正常小鼠快，故認(rèn)為Cavrolin1是抑癌基因[6]。
　　關(guān)于Caveolin1在膠質(zhì)瘤中表達(dá)的研究，目前尚不多見(jiàn)，筆者在國(guó)內(nèi)還未見(jiàn)這方面的報(bào)道。近國(guó)外有學(xué)者Cassoni等[7]通過(guò)免疫組化方法，研究了64例不同級(jí)別的膠質(zhì)瘤中Caveolin1的表達(dá)。結(jié)果顯示所有星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤均陽(yáng)性表達(dá)，Caveolin1非常典型的定位于細(xì)胞膜，表達(dá)強(qiáng)度與腫瘤的級(jí)別密切相關(guān)。本研究用免疫組化的方法觀察了Caveolin1在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)情況，結(jié)果表明Caveolin1在膠質(zhì)瘤中隨著病理級(jí)別的增高表達(dá)下降。本研究的結(jié)果與一些學(xué)者認(rèn)為Caveolin1是一抑癌基因的研究結(jié)果相同[4-6]，與國(guó)外學(xué)者研究Caveolin1在膠質(zhì)瘤中表達(dá)的結(jié)果基本一致[7]。提示Caveolin1蛋白的表達(dá)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖起抑制作用，Caveolin1的失表達(dá)對(duì)判斷膠質(zhì)瘤的惡性行為有一定價(jià)值，亦可作為膠質(zhì)細(xì)胞瘤預(yù)后評(píng)價(jià)的參考指標(biāo)之一;同時(shí)也說(shuō)明了Caveolin1蛋白在膠質(zhì)細(xì)胞瘤中表現(xiàn)為一個(gè)抑癌基因。
　　PCNA作為DNA聚合酶δ的輔助蛋白，在DNA復(fù)制合成、細(xì)胞增殖過(guò)程中是一種必需的物質(zhì)。目前大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為PCNA可以代表腫瘤細(xì)胞增殖能力，在一定程度上反映腫瘤惡性程度，對(duì)于分析、判斷膠質(zhì)瘤的預(yù)后有重要意義。Camby等[8]利用抗PCNA抗體獲得的細(xì)胞增殖水平顯示星形細(xì)胞瘤和間變型星形細(xì)胞瘤之間存在非常顯著的差異;Kayaselcuk等[9]在對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，PCNA指數(shù)與組織學(xué)分級(jí)有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為PCNA可用于評(píng)價(jià)腫瘤的分級(jí)、惡性程度以及估計(jì)腫瘤復(fù)發(fā)的可能性。本組研究中，PCNA隨著病理級(jí)別的增高陽(yáng)性表達(dá)率升高。這表明PCNA的表達(dá)強(qiáng)度與腫瘤的分化程度有關(guān)，惡性程度高的膠質(zhì)瘤，其腫瘤細(xì)胞增殖活性強(qiáng)。本研究證實(shí)PCNA可以作為病理診斷的補(bǔ)充，能夠客觀地反映膠質(zhì)瘤的惡性增殖分?jǐn)?shù)和生長(zhǎng)速度，預(yù)測(cè)術(shù)后復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)性，這與國(guó)內(nèi)、外的類(lèi)似研究結(jié)果一致[8，9]。
　　作為一種抑癌基因Caveolin1的異常表達(dá)必將引起細(xì)胞增殖活性的改變。與此推斷相一致，本組資料的分析結(jié)果表明，在別的膠質(zhì)瘤細(xì)胞中Caveolin1表達(dá)缺失，而PCNA表達(dá)陽(yáng)性率卻明顯升高;在正常腦組織及低級(jí)別膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，PCNA表達(dá)陽(yáng)性率明顯降低。本實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果提示Caveolin1的表達(dá)對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖具有抑制作用，表明Caveolin1是膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的一種抑制因子。相信隨著研究的進(jìn)一步深入，PCNA和Caveolin1均有可能作為臨床判斷膠質(zhì)細(xì)胞瘤惡性程度及預(yù)測(cè)患者預(yù)后的指標(biāo)，通過(guò)對(duì)它們的深入研究，有可能為腫瘤的放化療及基因治療提供有價(jià)值的理論和依據(jù)。