尿液甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶測定在2型糖尿病和高血壓患者中的診斷價值

    作者：楊愷,熱依汗•謝以提,王學(xué)涵　　作者單位：新疆醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)中心, 第五附屬醫(yī)院檢驗(yàn)中心, 新疆烏魯木齊

　　【關(guān)鍵詞】 2型糖尿病

　　2型糖尿病(2DM)和原發(fā)性高血壓(EH)常有共同的環(huán)境遺傳因素和發(fā)病機(jī)制,二者可同時或相繼發(fā)生。腎臟是2DM和EH主要累及的靶器官之一[1]。幾乎所有DM患者隨病情的發(fā)展，病程的延長，終將出現(xiàn)不同程度的微血管病變，繼而發(fā)生腎臟的損害。當(dāng)常規(guī)出現(xiàn)尿蛋白時，腎臟病變往往不可逆轉(zhuǎn)，終導(dǎo)致腎功能衰竭，這也是導(dǎo)致DM患者死亡的主要原因[2]。因此，早期發(fā)現(xiàn)DM患者腎臟受損，及時采取合適的治療措施，阻止或延緩DM的并發(fā)癥，具有重要的臨床價值。1966年 Hopsu_Havuh 等在鼠的肝、腎中發(fā)現(xiàn)一種新的二肽氨基肽酶。此后，國外學(xué)者提純了甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)，并且建立了測定方法。國內(nèi)自80年代陸續(xù)開展了血清GPDA測定方法及臨床應(yīng)用研究，并對其臨床應(yīng)用價值進(jìn)行了初步探討[3]。我科對225例正常人和55例已確診的2型糖尿病及36例高血壓患者進(jìn)行了尿液甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)測定，并與正常健康對照組比較，以探討測定GPDA對2型糖尿病和高血壓患者腎臟早期損害的診斷價值。

　　1資料與方法

　　1.1研究對象糖尿病和高血壓患者疾病組：其中2型糖尿病患者55例，發(fā)生腎損害組23例，未發(fā)生腎損害組32例，平均年齡54歲。高血壓患者36例，發(fā)生腎損害組15例，未發(fā)生腎損害組21例，平均年齡56歲。正常對照組：體檢正常者225例，男性116例，女性109例，平均年齡49歲。

　　1.2標(biāo)本采集隨機(jī)留取的新鮮尿液10 ml，3 000r/min離心沉淀10 min，取上清液于4 h內(nèi)完成測試。

　　1.3方法

　　1.3.1檢測原理尿液中GPDA催化底物甘氨酰脯氨酰對硝基苯胺水解，生成甘氨酰脯氨酸和黃色的對硝基苯胺，后者可引起吸光度的升高，吸光度升高速率與GPDA活性成正比。

　　1.3.2測定方法采用連續(xù)監(jiān)測法以甘氨酰脯氨酰對硝基苯胺為底物檢測尿液GPDA,試劑盒為北京利德曼公司產(chǎn)品;尿液肌酐(Cr)采用Jaffe速率法測定，試劑盒由BECKMAN公司提供,儀器為美國BECKMAN公司全自動生化分析儀LX20。在BECKMAN全自動生化分析儀上，主波長410 nm ，副波長600 nm，樣品10 μl，根據(jù)公式計(jì)算尿酶活性:

　　尿GPDA酶活性[U/(g•Cr)=尿GPDA(U/L)/尿Cr(g/L)]

　　尿Cr(g/L)=Cr (μmol/L)×0.000 113

　　1.4判定指標(biāo)糖尿病和高血壓合并腎損害分為3個階段：階段腎小球基本正常,腎內(nèi)壓增加，此時可出現(xiàn)尿微量蛋白升高，微蛋白尿作為判斷腎臟早期損傷的“金指標(biāo)”;第二階段腎小管高壓性損傷隨后出現(xiàn)腎小球早期損傷,可出現(xiàn)血中β2微球蛋白輕度升高;第三階段腎小球硬化,腎小管萎縮(主要為腎小球損傷的證據(jù))。

　　1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理同年齡組不同性別間及不同疾病GPDA比較采用t檢驗(yàn)，不同年齡組間顯著性檢驗(yàn)采用F檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

　　2結(jié)果

　　2.1線性范圍將一份GPDA高值(350 U/L)尿液標(biāo)本，用生理鹽水作倍比稀釋后，結(jié)果在350 U/L以下線性良好。

　　2.2精密度結(jié)果取高、低值尿液標(biāo)本各一份，分別作批內(nèi)和批間重復(fù)性測定。批內(nèi)重復(fù)測定20次，作為批內(nèi)重復(fù)觀察指標(biāo)，其變異系數(shù)為0.61%～1.27%;批間測定時，將標(biāo)本4℃冷藏，每天重復(fù)測定3次，連測6 d，作為批間重復(fù)觀察指標(biāo)，其變異系數(shù)為0.70%～1.33%。

　　2.3尿GPDA穩(wěn)定性將尿液標(biāo)本分別置20℃室溫和4℃冰箱存放,每天檢測。結(jié)果4℃保存7 d，GPDA活性無變化，20℃室溫存放(加防腐劑)7 d，GPDA活性下降11.2%。

　　2.4干擾試驗(yàn)在已測量GPDA活性的尿液中分別加入不同濃度的膽紅素、血紅蛋白、維生素C、葡萄糖及二甲雙胍、格列苯脲做干擾試驗(yàn)。結(jié)果顯示膽紅素171 μmol/L、維生素C 6 g/L、葡萄糖30 g/L、二甲雙胍3 g/L、格列苯脲20 mg/L時對GPDA測定無影響：血紅蛋白濃度<500 mg/L時對GPDA測定無影響，當(dāng)其濃度>500 mg/L時，可使GPDA測定結(jié)果偏低，1 000 mg/L時可使GPDA下降約17%。

　　2.5正常參考值225名不同年齡組體檢正常者尿液GPDA活性，經(jīng)D檢驗(yàn)呈正態(tài)分布，男女性別間GPDA活性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)，不同年齡組間GPDA差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

　　2.6糖尿病、高血壓病患者及正常對照組尿GPDA測定結(jié)果高血壓腎損害組、糖尿病腎損害組與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。而正常對照組與高血壓、糖尿病未發(fā)生腎損害組尿GPDA比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

　　表1225例正常人GPDA參考值 (略)

　　表2糖尿病、高血壓病患者尿GPDA測定結(jié)果與正常人比較(略)

　　注：與正常對照組比較, *P<0.01

　　3討論

　　血清中GPDA是分子量為220 000的大分子量蛋白，不易通過腎小球基底膜。因此，尿中GPDA大多來源于腎臟，由于腎臟特別是腎小管中含有較豐富的GPDA，當(dāng)腎臟受損時，GPDA便排入尿液，使尿中GPDA活性升高[4]。GPDA的測定目前多數(shù)以新人工底物甘氨酰脯氨酸對硝基苯胺為檢測，方法有連續(xù)監(jiān)測法、非連續(xù)的直接比色法和間接比色法。我們通過對各種檢測條件及干擾因素下的血清及尿液GPDA的測定試驗(yàn)觀察，用連續(xù)監(jiān)測法測定尿液中GPDA具有簡便、快速、重復(fù)性好、線性范圍寬、敏感度高、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，本法所用底物穩(wěn)定易溶。本研究顯示，225名體檢正常者尿液GPDA測定值為(12.9±4.1)U/(g•Cr)，呈正態(tài)分布，且參考值范圍為4.9～20.9 U/(g•Cr)，可為臨床應(yīng)用提供一定的參考數(shù)據(jù)。本研究還顯示發(fā)生早期腎損害者尿GPDA的活性顯著高于未發(fā)生腎損害組及正常對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。由此可見，尿液GPDA是診斷高血壓及糖尿病患者早期腎臟損害的敏感指標(biāo),特別是腎小管早期損傷,對于高血壓、糖尿病腎病的早期診斷、腎功能損害程度判斷具有一定的價值。因此，通過測定尿GPDA可判斷早期腎臟損害的發(fā)生。