五分類
血液分析儀和三分群血液
分析儀相比，由于增加了對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞的常規(guī)檢測(cè)，更能滿足臨床需要，因此將逐漸進(jìn)入各級(jí)醫(yī)院檢驗(yàn)科 為能選擇一臺(tái)適合自己醫(yī)院的五分類血液分析儀，現(xiàn)對(duì)五分類血液分析儀的白細(xì)胞分類原理和代表型號(hào)做簡(jiǎn)要分析。
1 電阻抗、高頻電導(dǎo)及激光散射聯(lián)合檢測(cè)法即庫爾特公司的VCS技術(shù)．V：代表體積容量(volume)也就是庫爾特首創(chuàng)發(fā)明的電阻抗原理．把電阻法微孔技術(shù)應(yīng)用于計(jì)數(shù)血細(xì)胞和測(cè)定其體積的大小。C：代表傳導(dǎo)性即電導(dǎo)(conductivity)．指一束電磁波或稱射頻．穿透細(xì)胞的傳導(dǎo)性，它取決于細(xì)胞的大小和內(nèi)部結(jié)構(gòu)；經(jīng)校正后的傳導(dǎo)性叫opacity即“不透明性”．這時(shí)不再反映細(xì)胞大?。欠从臣?xì)胞內(nèi)部的結(jié)構(gòu)．像核的大小，核漿比例和密度等。S：代表散射(scatter)．指在不同角度測(cè)得的散射光強(qiáng)度。由于各類細(xì)胞的表面結(jié)構(gòu)不同和顆粒大小不同而對(duì)光的散射各異，進(jìn)而區(qū)分各類細(xì)胞。庫爾特公司設(shè)計(jì)在單一通道上同時(shí)用這三種方法對(duì)同一白細(xì)胞進(jìn)行測(cè)量，避免了有些血液分析儀要設(shè)計(jì)好幾個(gè)通道或加染色試劑的麻煩。儀器具體的運(yùn)作是：根據(jù)流體力學(xué)的原理，應(yīng)用鞘流技術(shù)使溶血后剩余的白細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞單個(gè)通過檢測(cè)器，接受VCS三種技術(shù)的同時(shí)檢測(cè)，完成白細(xì)胞分類過程。VCS技術(shù)在Coulter公司的STKS型、MAXM 型以及Gen．s型五分類血液分析儀上均已成功的應(yīng)用。而且MAXM 型和Gen．s型可計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞，Gel1．S型可選配自動(dòng)制血片機(jī)。以上幾種型號(hào)還可直接計(jì)數(shù)CD 和CD。淋巴細(xì)胞，并算出其比率。
2 光散射和細(xì)胞化學(xué)染色聯(lián)合檢測(cè)法
即利用激光散射和過氧化物酶染色技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分類。利用光散射的原理計(jì)數(shù)血細(xì)胞，因細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)不同，在不同角度上散射光有差別，有助于對(duì)白細(xì)胞的區(qū)分。白細(xì)胞化學(xué)染色即是在稀釋液中加入過氧化酶(MPO)的底物及現(xiàn)色劑，根據(jù)白細(xì)胞對(duì)MP0的反應(yīng)分類。中性細(xì)胞MP0 為強(qiáng)陽性，嗜酸性細(xì)胞陽性更強(qiáng)，單核細(xì)胞為弱陽性，淋巴細(xì)胞性，嗜堿性細(xì)胞亦為陰性，故綜合光散射和細(xì)胞化學(xué)染色的特點(diǎn)，在電腦顯示屏上可得到類似流式細(xì)胞儀的二維或三維圖像一一不同顏色的散點(diǎn)圖．并可打出分類結(jié)果。由于嗜堿性細(xì)胞不含此酶，不能被檢測(cè)．因此一些儀器專門設(shè)置了嗜堿性細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)．它的測(cè)量通道采用時(shí)間差的方法，與RBC／PLT的測(cè)量系統(tǒng)共用一個(gè)通道。在激光技術(shù)中目前有
半導(dǎo)體激光和氣體激光。半導(dǎo)體激光功率弱，但作為細(xì)胞分類自己足夠；氣體激光功率強(qiáng) 二者比較半導(dǎo)體激光具有壽命長(7～1O年)體積小，啟動(dòng)快．耗電小，對(duì)穩(wěn)壓要求低，更為’經(jīng)濟(jì)適用等特點(diǎn)。Bayer公司的的ADVIA 120型和2120型
血細(xì)胞分析儀是用光散射原理進(jìn)行血細(xì)胞分析的代表。Sysmex公司的SF-3000型血
細(xì)胞分析儀也用此原理進(jìn)行工作。
3 電阻抗和射頻電導(dǎo)聯(lián)合檢測(cè)法
這種方法是分別采用四個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)來檢測(cè)不同類型的細(xì)胞① 淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)：在細(xì)胞懸浮淮中加入溶血?jiǎng)┦辜t細(xì)胞溶解，而使白細(xì)胞保持完整，細(xì)胞漿及核形態(tài)近似于生理狀態(tài)，當(dāng)這些細(xì)胞通過檢測(cè)系統(tǒng)時(shí)，對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行電阻抗法(測(cè)量細(xì)胞體積)和射頻電導(dǎo)法(檢測(cè)細(xì)胞核和顆粒密度)的聯(lián)合檢測(cè)，結(jié)果將細(xì)胞分成淋巴細(xì)胞、單核細(xì)和中性粒細(xì)胞三個(gè)群體。② 嗜酸性細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞兩種檢測(cè)系統(tǒng)：在細(xì)胞懸浮液中加入特殊的溶血?jiǎng)?，除嗜酸性?xì)胞和嗜堿性細(xì)胞外，其他細(xì)胞均被溶解或萎縮．再對(duì)保持完整的嗜酸性細(xì)胞或嗜堿性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。③幼稚細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)：在細(xì)胞懸浮液中加入硫化氨基酸，由于占位不同，結(jié)合在幼稚細(xì)胞的氨基酸比成熟細(xì)胞多．且對(duì)溶血?jiǎng)┯械挚棺饔?，?dāng)加入溶血?jiǎng)r(shí)．成熟細(xì)胞被溶解，只保留著可能存在的幼稚細(xì)胞用來計(jì)數(shù)。Sysmex公司的SE一9000血細(xì)胞分析儀就是采用這種方法進(jìn)行五分類的。該儀器可顯示及打印四個(gè)直方圖、兩個(gè)散點(diǎn)圖．一個(gè)報(bào)告表以及FLAG信息等。但該儀器配套的Labman中文軟件卻無法打印散點(diǎn)圖。SE一9000血細(xì)胞分析儀有監(jiān)測(cè)造血干細(xì)胞的功能。SE一9000血細(xì)胞分析儀和該公司研制的SP100自動(dòng)制片染色機(jī)以及R3000／2000網(wǎng)織紅細(xì)胞
計(jì)數(shù)儀組合起來，加上一個(gè)電腦工作站．構(gòu)成一套該公司稱為HST的系列，即可形成全部血細(xì)胞分析自動(dòng)化系統(tǒng)。
4 多角度激光偏振光散射檢測(cè)法
采用這種技術(shù)的儀器使用鞘流液將標(biāo)本血稀釋，稀釋后白細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài)，只有嗜堿性細(xì)胞由于其吸濕的特性而使細(xì)胞結(jié)構(gòu)有輕微改變。紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白在高滲透壓的作用下．從細(xì)胞中分離出來。而鞘流的水分則進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)．使細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)仍然完整，它與鞘流的折光系數(shù)相同，不影響白細(xì)胞的檢測(cè)。儀器同時(shí)從四個(gè)角度來檢測(cè)通過激光束的細(xì)胞所產(chǎn)生的散射光，因?yàn)榧?xì)胞大小、折射指數(shù)、核形、核漿比率以及顆粒性質(zhì)等，均可影響在不同角度測(cè)得的散射光量。O。前角散射光用來測(cè)定細(xì)胞的體積，1O。狹角散射光用來測(cè)定細(xì)胞結(jié)構(gòu)．9O。垂直散射光對(duì)細(xì)胞內(nèi)部顆粒及細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行測(cè)量，9O。消偏振光散射將嗜酸性細(xì)胞從中性粒細(xì)胞和其它細(xì)胞中分離出來。所有原始數(shù)據(jù)，借助先進(jìn)的電腦軟件處理，在屏幕上顯示6個(gè)散點(diǎn)圖和2個(gè)直方圖。
ABBOTT 公司的CD一3000型，CD一3500型血細(xì)胞分析儀采用了此技術(shù)。為了解決新生兒紅細(xì)胞對(duì)溶血?jiǎng)┑挚沟膯栴}，該儀器還設(shè)計(jì)了一種新的專用試劑，為該儀器所特有。值得一提的是市面上偶見假五分類
血球儀。假五分類血球儀則不用上述原理分析血細(xì)胞成分，更多的使用電腦軟件的分析而得出五分類結(jié)果。分辨經(jīng)驗(yàn)是真五分類技術(shù)的血球儀如果是試劑法，溶血素不應(yīng)該少于四種，如果是激光法．溶血素不少于三種。在五分類血液分析儀的具體技術(shù)上，每家廠商．每種型號(hào)都有自己的特點(diǎn)、長處。比如兩臺(tái)血細(xì)胞儀器，一臺(tái)對(duì)于大多數(shù)環(huán)境、各種標(biāo)本都能適應(yīng)，都能出結(jié)果，可結(jié)果不一定可靠。另一臺(tái)就要求嚴(yán)格，對(duì)于一些異常就不出結(jié)果，但出的結(jié)果就比較可靠。若一臺(tái)儀器將物理、化學(xué)、特殊通道、先進(jìn)技術(shù)集一身 測(cè)定指標(biāo)一定很多，儀器一定很貴，收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)也高，故不適合門診篩查。
選儀器要符合醫(yī)院的要求，比如是偏重質(zhì)量，還是速度，還是操作，還是價(jià)格等等。筆者建議一般綜合醫(yī)院門診．選擇染色后激光分類就夠了，因這種儀器分類已準(zhǔn)確，且價(jià)格便宜．消耗便宜；若是為兒科血液科血液分析專用儀器，那就一定要買有網(wǎng)織細(xì)胞，能識(shí)別幼稚細(xì)胞，有光學(xué)血小板測(cè)定者更好；若是要測(cè)造血干細(xì)胞就一定要買FDA(美國食品與藥
物管理局)iX可的儀器。近年來，實(shí)驗(yàn)室全自動(dòng)化進(jìn)入檢驗(yàn)科。因此選購儀器時(shí)還要考慮該儀器與標(biāo)本前處理是否能相接，與標(biāo)本傳輸系統(tǒng)能否相接．與網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)能否相接，能否實(shí)現(xiàn)血液分析的全自動(dòng)化。后要強(qiáng)調(diào)的是儀器的好與壞，除與儀器本身性能有關(guān)還取決于會(huì)不會(huì)真正使用儀器的人。
