黑木耳多糖和五味子醇提物對(duì)對(duì)乙酰氨基酚致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用

　   作者：徐秀卉1，楊　波2，陸振宇1 作者單位：1.杭州康恩貝制藥有限公司(杭州　310052);2.哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院(哈爾濱　150076)

　　【摘要】 目的：研究黑木耳多糖和五味子醇提取物配伍使用對(duì)對(duì)乙酰氨基酚引起的小鼠急性肝損傷協(xié)同保護(hù)作用。方法：以對(duì)乙酰氨基酚200mg/kg腹腔注射給藥造成小鼠急性肝損傷模型，通過測定小鼠血液中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)和肝臟組織還原性谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)的含量來評(píng)價(jià)五味子醇提取物、黑木耳多糖及二者配伍后對(duì)小鼠肝損傷的保護(hù)作用。結(jié)果：五味子醇提取物(200mg/kg)和黑木耳多糖(250mg/kg)單獨(dú)給藥對(duì)肝臟的保護(hù)作用不顯著。二者配伍給藥(五味子醇提取物+黑木耳多糖，100mg/kg+125mg/kg,200mg/kg+250mg/kg)可以顯著改善ALT、AST、GST、GSH和MDA各項(xiàng)指標(biāo)(P<0.05或P<0.01)。兩藥相互作用指數(shù)CDI均小于1.00。結(jié)論：五味子醇提取物與黑木耳多糖配伍使用可以保護(hù)對(duì)乙酰氨基酚引起的急性肝損傷，二者作用呈現(xiàn)協(xié)同效應(yīng)。

　　【關(guān)鍵詞】 黑木耳多糖;五味子;對(duì)乙酰氨基酚;肝損傷

　　Abstract：ob[x]jective：To study the synergistic protective effect of alcohol extracts from Shizandra (AES) with Auricularia auriculajudae polysaccharides (AAP) on Paracetamol (Par)-induced acute liver injury in mice.Methods：Mice liver injury was induced by peritoneal injection Par physiologic saline solution at a dose of 200mg/kg.The activities of serum alanine amiotransferase (ALT)，aspartate aminotransferase (AST)，glutathione s-transterase (GST) and malonaldehyde (MDA)，glutathione (GSH) in the liver tissue were observed to evaluate the effects of AES，AAP and their combination on liver injury.Results：The AES (200mg/kg) or AAP (250mg/kg) alone did not produce any effect on liver injury.The combination of AES at dose of 100、200mg/kg respectively with AAP at dose of 125、250mg/kg significantly improved the levels of ALT、AST、GST、GSH and MDA (P<0.05 or P<0.01).And the coefficients of drug interaction (CDI) were all less than 1.00.Conclusion：The combination of AES and AAP may play a part in protecting mice liver from Par，and the AES and AAP show the synergistic effect.

　　Key words：Auricularia auriculajudae polysaccharides;Shizandra;paracetamol;liver injury

　　現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，五味子(Schisandra chinensis Turcz Bail.)醇提物對(duì)肝損傷具有一定的保護(hù)作用，其主要活性物質(zhì)為五味子醇甲和五味子乙素[1]。黑木耳多糖是從黑木耳(Auricularia auriculajudae)中提取的多糖類物質(zhì)，具有免疫調(diào)節(jié)，抗腫瘤，抗衰老，降血糖，抗氧化[2-6]等作用。本實(shí)驗(yàn)研究五味子醇提取、黑木耳多糖及其組合物對(duì)對(duì)乙酰氨基酚引起的小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。

　　1　材料與方法

　　1.1　藥物與試劑

　　對(duì)乙酰氨基酚(SIGMA，批號(hào)：115K0098);ALT、AST、GST、GSH、MDA及蛋白定量試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

　　1.2　儀器

　　BS124S電子天平(德國賽多利斯);低速離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠);紫外可見分光光度計(jì)(上海光譜有限公司)。

　　1.3　試液的制備

　　干燥的五味子藥材1000g以10倍量95%乙醇進(jìn)行回流提取兩次，每次2h，合并提取液，過濾，減壓濃縮至無醇味，取出，水浴揮發(fā)至藥材溶液為100g。稱取10g預(yù)處理的黑木耳粉末，以微波功率90W，提取時(shí)間20min，料液比1：25，提取次數(shù)4次為提取條件進(jìn)行提取。提取液以4000r/min離心10min，取上清液加入95%乙醇至乙醇終濃度為80%，靜置過夜，抽濾，沉淀經(jīng)無水乙醇、丙酮、石油醚各抽洗3次，干燥得黑木耳多糖，以苯酚硫酸法測得多糖含量為45.6%，配置成1000ml多糖溶液。

　　1.4　動(dòng)物分組

　　雄性昆明種小鼠，體重18-22g，隨機(jī)分為7組，每組10只，即正常對(duì)照組(生理鹽水25ml/kg)，模型組(生理鹽水25ml/kg)，五味子醇提取物組(200mg/kg)，黑木耳多糖組(250mg/kg)，配伍低劑量組(五味子醇提物50mg/kg+黑木耳多糖62.5mg/kg)，配伍中劑量組(五味子醇提物100mg/kg+黑木耳多糖125mg/kg)，配伍高劑量組(五味子醇提物200mg/kg+黑木耳多糖250mg/kg)。每日按計(jì)量灌胃給藥，連續(xù)10d，末次給藥后1h，除正常對(duì)照組外，其余各組均腹腔注射對(duì)乙酰氨基酚生理鹽水溶液200mg/kg造模。小鼠禁食24h后，摘除小鼠眼球取血制血清并取出肝臟制備勻漿測定相應(yīng)指標(biāo)。

　　1.5　指標(biāo)測定

　　1.5.1　血清AST、ALT、GST的測定

　　取血后靜置1h,3000r/min離心15min，取血清，AST、ALT、GST的測定均按試劑盒說明書進(jìn)行。

　　1.5.2　肝勻漿中MDA和GSH的測定

　　取出肝臟，以0.9%冰生理鹽水清洗掉血液后制成10%組織勻漿備用。GSH、MDA及蛋白含量的測定均按試劑盒說明書進(jìn)行。

　　1.5.3　藥物聯(lián)合作用評(píng)價(jià)

　　采用兩藥相互作用指數(shù)(CDI)評(píng)價(jià)兩藥相互作用性質(zhì)，CDI=AB/(A×B)。其中AB為兩藥聯(lián)合組與對(duì)照組指標(biāo)的比值;A或B是各藥物單獨(dú)使用組與對(duì)照組指標(biāo)的比值。若CDI<1，兩藥作用性質(zhì)為協(xié)同，CDI=1，兩藥作用性質(zhì)為相加，CDI>1，兩藥作用性質(zhì)為拮抗。

　　2　結(jié)果

　　2.1　對(duì)小鼠血清AST、ALT的影響

　　與正常組相比較模型組AST和ALT均顯著升高。五味子醇提取物和黑木耳多糖對(duì)小鼠血清中AST的水平?jīng)]有顯著的影響，但是可以顯著降低ALT的水平(P<0.05)。配伍低、中、高劑量組對(duì)AST的影響分別為P<0.05，P<0.05和P<0.01;對(duì)ALT的影響分別為P<0.05，P<0.01和P<0.01。結(jié)果見表1。表1　對(duì)小鼠血清中AST和ALT的影響

　　2.2　對(duì)小鼠血清GST和肝組織GSH的影響

　　與正常對(duì)照組相比較模型組血清中GST的水平顯著升高，肝組織中的GSH水平顯著下降。五味子醇提取物對(duì)二者無顯著影響，黑木耳多糖可升高GSH水平(P<0.05)。配伍低、中、高劑量組對(duì)GST的影響分別為P>0.05，P<0.05和P<0.05;對(duì)GSH的影響分別為P<0.05，P<0.01和P<0.01。結(jié)果見表2。表2　對(duì)小鼠血清中GST和肝組織中GSH的影響

　　2.3　對(duì)小鼠肝組織MDA的影響

　　與正常對(duì)照組相比較模型組肝組織中MDA的水平顯著升高。五味子醇提取物、黑木耳多糖及配伍低劑量組對(duì)MDA均無顯著影響。配伍中、高劑量組均顯著降低肝組織中的MDA水平(P<0.01)。結(jié)果見表3。表3　對(duì)小鼠肝組織中MDA的影響

　　3　討論

　　實(shí)驗(yàn)可知，過量的對(duì)乙酰氨基酚可引起小鼠肝臟急性損傷，其代謝過程中產(chǎn)生的N-乙酰基-對(duì)苯醌亞胺超過了GSH的解毒能力，從而引起肝功能減退，ALT及AST在血液中的水平顯著升高。同時(shí)，對(duì)乙酰氨基酚還可引起血液中GST升高，肝組織中GSH降低和MDA升高，這一結(jié)果可能是對(duì)乙酰氨基酚在肝內(nèi)代謝過程中產(chǎn)生的自由基引起肝細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化造成的。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看，配伍劑量組可以顯著改善上述各項(xiàng)指標(biāo)，而五味子醇提取物及黑木耳多糖單獨(dú)使用效果不明顯。另外，CDI結(jié)果表明，二者配伍應(yīng)用具有協(xié)同保肝作用。